CSF Free Kappa Light Chain til diagnosticering af demyeliniserende lidelser

Multipel sklerose (MS) er en demyeliniserende sygdom i centralnervesystemet (CNS), som ofte fører til invaliditet. Det er den mest almindelige invaliderende neurologiske sygdom, der findes hos unge voksne, som oftest viser sig i alderen 20 til 40 år. Den nuværende foretrukne kliniske laboratorietest til diagnosen er påvisning af oligoklonale bånd (OCB'er) i cerebrospinalvæsken (CSF) ved isoelektrisk fokuseringselektroforese (IEF) efterfulgt af immunoblotting. Denne manuelle teknik kræver, at parrede CSF- og serumprøver køres parallelt med en subjektiv visuel fortolkning. Flertrinsmetoden er arbejdskrævende og dyr, med en gennemsnitlig tid til analytisk behandling på over 3 timer. Der er ingen standarddefinition af OCB-mængder, der kræves for et klinisk positivt resultat. Med forskellige tilgange fra forskellige institutioner kan positivitet karakteriseres af alt fra 1 til 4 unikke CSF-bånd, hvilket signifikant påvirker sensitiviteten og specificiteten af ​​assayet. Måling af niveauerne af Kappa Free Light Chain (K-FLC) i CSF er blevet foreslået som et potentielt alternativ til den kvalitative vurdering af OCB'er. Denne laboratoriebaserede valideringsundersøgelse ville give laboratoriet mulighed for at skære i udgifterne ved at reducere teknologens tid og eliminere dyre IEF-sæt. Derudover ville K-FLC erstatte subjektiv fortolkning med kvantitative værdier og overvinde udfordringerne forbundet med ydeevnen og den subjektive fortolkning af OCB-test. Formålet med denne undersøgelse er at validere og bestemme det diagnostiske udbytte af K-FLC i CSF mod OCB'er via IEF som guldstandard.

OCB via IEF udføres rutinemæssigt på Sektionen for Kemisk Patologi til patienter med mistanke om MS eller demyeliniserende lidelser. Parrede patient-CSF- og serumprøver opsamles. De oligoklonale bånd testes af IEF på agarosegel ved hjælp af Interlab diagnostics CSF IEF-kit og manuelle immunoblotting-trin for at overføre proteinerne på overførselsmembraner. Samtidig analyse udføres også på serumprøver. Mønstret af oligoklonale bånd i CSF gennemgås af patologen, og deres resultater noteres som positive eller negative for tilstedeværelse eller fravær af CSF OCB eller matching, det vil sige bånd, der er til stede i både serum og CSF.

Prøverne modtaget i løbet af de sidste 3 måneder fra juni til august til OCBS via IEF gemmes i laboratoriet under frosne forhold, stabile til analyse. 0,5 ml CSF-prøve vil blive brugt til analyse ved nefelometri på Beckman Immage-800 analysator ved hjælp af kits fra Freelite, The Binding Site, i henhold til producentens instruktioner.

For at sikre fortrolighed vil alle identifikationsoplysninger blive anonymiseret, og undersøgelsesidentifikatorer vil blive tildelt. Derudover vil alle data blive gemt i et kodeordsbeskyttet elektronisk format af PI.

Under hensyntagen til den lave forventede frekvens af demyeliniserende lidelser på et enkelt center; og for at opnå signifikant styrke og pålidelighed af statistisk analyse, vil en minimumsprøvestørrelse på 60 CSF-prøver til K-FLC-analyse blive inkluderet med stratificering i 3 grupper: Positiv (n=20), negativ (n=20) og matchende (n) =20), for OCB'er.

Dataanalyse vil blive udført på SPSS version 25. Shapiro Wilk test vil blive brugt til at kontrollere normaliteten af ​​data. Diagnostisk nøjagtighed af CSF K-FLC vil blive beregnet på basis af sensitivitet, specificitet, PPV og NPV med OCB som guldstandard. For yderligere analyse vil Receiver Operative Karakteristik (ROC) kurve blive plottet for OCB og arealet under kurven (AUC) vil blive beregnet og optimal cut-off vil blive genereret ved hjælp af Youdens Index. Til valideringsaftalen mellem CSF vil L-FLC og IEF blive vurderet af Cohens kappa-statistikker.