CSF-vapaa Kappa-valoketju demyelinisoivien sairauksien diagnosointiin

Multippeliskleroosi (MS) on keskushermoston (CNS) demyelinisoiva sairaus, joka yleensä johtaa vammaisuuteen. Se on yleisin nuorten aikuisten vammauttava neurologinen sairaus, joka esiintyy yleisimmin 20–40-vuotiailla. Nykyinen suositeltava kliininen laboratoriotesti diagnoosia varten on oligoklonaalisten juovien (OCB) havaitseminen aivo-selkäydinnesteestä (CSF) isoelektrisellä fokusoivalla elektroforeesilla (IEF), jota seuraa immunoblottaus. Tämä manuaalinen tekniikka edellyttää, että parilliset CSF- ja seeruminäytteet ajetaan rinnakkain subjektiivisen visuaalisen tulkinnan avulla. Monivaiheinen menetelmä on työvoimavaltainen ja kallis, ja analyyttiseen käsittelyyn kuluu keskimäärin yli 3 tuntia. Kliinisesti positiiviseen tulokseen ei vaadita OCB-määrien vakiomäärittelyä. Eri instituutioiden erilaisilla lähestymistavoilla positiivisuus voidaan luonnehtia millä tahansa 1-4 ainutlaatuisella CSF-vyöhykkeellä, mikä vaikuttaa merkittävästi määrityksen herkkyyteen ja spesifisyyteen. Kappa Free Light Chain (K-FLC) -tasojen mittaamista CSF:ssä on ehdotettu mahdolliseksi vaihtoehdoksi OCB:iden kvalitatiiviselle arvioinnille. Tämä laboratoriopohjainen validointitutkimus antaisi laboratoriolle mahdollisuuden leikata menoja vähentämällä tekniikan aikaa ja poistamalla kalliit IEF-sarjat. Lisäksi K-FLC korvaisi subjektiivisen tulkinnan kvantitatiivisilla arvoilla, mikä voittaisi OCB-testauksen suorituskykyyn ja subjektiiviseen tulkintaan liittyvät haasteet. Tämän tutkimuksen tavoitteena on validoida ja määrittää K-FLC:n diagnostinen saanto CSF:ssä OCB:itä vastaan ​​kultastandardina IEF:n kautta.

OCB IEF:n kautta suoritetaan rutiininomaisesti kemiallisen patologian osastolla potilaille, joilla on epäilyksiä MS-tautia tai demyelinoivaa sairautta. Parilliset potilaan CSF- ja seeruminäytteet kerätään. Oligoklonaaliset vyöhykkeet testataan IEF:llä agaroosigeelillä käyttämällä Interlabin diagnostiikka CSF IEF -pakkausta ja manuaalisia immunoblottausvaiheita proteiinien siirtämiseksi siirtokalvoille. Samanaikainen analyysi suoritetaan myös seeruminäytteille. Patologi tarkastelee oligoklonaalisten vyöhykkeiden mallia CSF:ssä, ja heidän löydöksensä todetaan positiivisiksi tai negatiivisiksi CSF:n OCB:n tai yhteensopivuuden, eli sekä seerumissa että CSF:ssä esiintyvien vyöhykkeiden osalta.

Viimeisten 3 kuukauden aikana kesäkuusta elokuuhun OCBS:lle IEF:n kautta saadut näytteet tallennetaan laboratorioon pakastettuihin olosuhteisiin, jotka ovat stabiileja analysointia varten. 0,5 ml CSF-näytettä käytetään analyysiin nefelometrisesti Beckman Immage-800 -analysaattorilla käyttämällä Freelite, The Binding Site -sarjoja valmistajan ohjeiden mukaisesti.

Luottamuksellisuuden varmistamiseksi kaikki tunnistetiedot anonymisoidaan ja tutkimustunnisteet jaetaan. Lisäksi PI tallentaa kaikki tiedot salasanalla suojatussa sähköisessä muodossa.

Ottaen huomioon demyelinisoivien häiriöiden alhainen esiintymistiheys yhdessä keskustassa; ja tilastollisen analyysin merkittävän tehon ja luotettavuuden saavuttamiseksi K-FLC-analyysiin sisällytetään vähintään 60 CSF-näytteen otos ja kerrostetaan kolmeen ryhmään: positiiviset (n=20), negatiiviset (n=20) ja vastaavat (n). =20), OCB:t.

Tietojen analysointi tehdään SPSS-versiolla 25. Shapiro Wilk -testiä käytetään tietojen normaaliuden tarkistamiseen. CSF K-FLC:n diagnostinen tarkkuus lasketaan herkkyyden, spesifisyyden, PPV:n ja NPV:n perusteella ottaen OCB:n kultastandardiksi. Lisäanalyysiä varten vastaanottimen toimintakäyrä (ROC) piirretään OCB:lle ja käyrän alla oleva pinta-ala (AUC) lasketaan ja optimaalinen leikkausraja luodaan Youdenin indeksin avulla. CSF:n välistä validointisopimusta varten L-FLC ja IEF arvioidaan Cohenin kappatilastoilla.