Liquorfreie Kappa-Leichtkette zur Diagnose demyelinisierender Erkrankungen

Multiple Sklerose (MS) ist eine demyelinisierende Erkrankung des Zentralnervensystems (ZNS), die häufig zu Behinderungen führt. Es handelt sich um die häufigste beeinträchtigende neurologische Erkrankung bei jungen Erwachsenen, die am häufigsten im Alter zwischen 20 und 40 Jahren auftritt. Der derzeit bevorzugte klinische Labortest für die Diagnose ist der Nachweis oligoklonaler Banden (OCBs) in der Liquor cerebrospinalis (CSF) durch isoelektrische Fokussierungselektrophorese (IEF) und anschließendes Immunblotting. Diese manuelle Technik erfordert die parallele Analyse gepaarter Liquor- und Serumproben mit einer subjektiven visuellen Interpretation. Die mehrstufige Methode ist arbeitsintensiv und kostspielig, wobei die durchschnittliche Zeit für die analytische Verarbeitung über 3 Stunden beträgt. Es gibt keine Standarddefinition für die OCB-Mengen, die für ein klinisch positives Ergebnis erforderlich sind. Mit unterschiedlichen Ansätzen verschiedener Institutionen kann die Positivität durch 1 bis 4 eindeutige CSF-Banden charakterisiert werden, was die Empfindlichkeit und Spezifität des Tests erheblich beeinflusst. Als mögliche Alternative zur qualitativen Bewertung von OCBs wurde die Messung der Konzentrationen der freien Kappa-Leichtkette (K-FLC) im Liquor vorgeschlagen. Diese laborbasierte Validierungsstudie würde es dem Labor ermöglichen, seine Ausgaben zu senken, indem die Zeit des Technikers verkürzt und teure IEF-Kits eingespart werden. Darüber hinaus würde K-FLC die subjektive Interpretation durch quantitative Werte ersetzen und so die Herausforderungen überwinden, die mit der Leistung und subjektiven Interpretation von OCB-Tests verbunden sind. Ziel dieser Studie ist die Validierung und Bestimmung der diagnostischen Ausbeute von K-FLC im Liquor gegen OCBs mittels IEF als Goldstandard.

OCB über IEF wird routinemäßig in der Abteilung für Chemische Pathologie bei Patienten mit Verdacht auf MS oder demyelinisierende Erkrankungen durchgeführt. Es werden paarweise Liquor- und Serumproben des Patienten entnommen. Die oligoklonalen Banden werden von IEF auf Agarosegel mit dem Interlab Diagnostics CSF IEF-Kit und manuellen Immunoblot-Schritten getestet, um die Proteine ​​auf Transfermembranen zu übertragen. Auch Serumproben werden simultan analysiert. Das Muster der oligoklonalen Banden im Liquor wird vom Pathologen überprüft und die Ergebnisse werden als positiv oder negativ hinsichtlich des Vorhandenseins oder Fehlens von Liquor-OCB oder entsprechendem Liquor, d. h. Banden, die sowohl im Serum als auch im Liquor vorhanden sind, vermerkt.

Die in den letzten drei Monaten von Juni bis August für OCBS über IEF erhaltenen Proben werden im Labor unter gefrorenen Bedingungen aufbewahrt und sind für die Analyse stabil. 0,5 ml CSF-Probe werden für die Analyse durch Nephelometrie auf dem Beckman Immage-800-Analysegerät unter Verwendung von Kits von Freelite, The Binding Site, gemäß den Anweisungen des Herstellers verwendet.

Um die Vertraulichkeit zu gewährleisten, werden alle Identifikationsdaten anonymisiert und Studienkennungen zugewiesen. Darüber hinaus werden alle Daten vom PI in einem passwortgeschützten elektronischen Format gespeichert.

Angesichts der voraussichtlich geringen Häufigkeit demyelinisierender Erkrankungen in einem einzelnen Zentrum; und um eine signifikante Aussagekraft und Zuverlässigkeit der statistischen Analyse zu erreichen, wird eine Mindeststichprobengröße von 60 CSF-Proben für die K-FLC-Analyse mit einer Schichtung in drei Gruppen einbezogen: positiv (n=20), negativ (n=20) und übereinstimmend (n =20), für OCBs.

Die Datenanalyse erfolgt mit SPSS Version 25. Der Shapiro-Wilk-Test wird verwendet, um die Normalität der Daten zu überprüfen. Die diagnostische Genauigkeit von CSF K-FLC wird auf der Grundlage von Sensitivität, Spezifität, PPV und NPV berechnet, wobei OCB als Goldstandard gilt. Zur weiteren Analyse wird die Receiver Operative Characteristic (ROC)-Kurve für OCB aufgezeichnet und die Fläche unter der Kurve (AUC) berechnet und der optimale Cut-Off wird unter Verwendung des Youden-Index generiert. Für die Validierungsvereinbarung zwischen CSF L-FLC und IEF wird die Kappa-Statistik von Cohen verwendet.