CSF-vrije kappa-lichtketen voor de diagnose van demyeliniserende aandoeningen

Multiple sclerose (MS) is een demyeliniserende ziekte van het centrale zenuwstelsel (CZS) die vaak leidt tot invaliditeit. Het is de meest voorkomende invaliderende neurologische aandoening die wordt aangetroffen bij jonge volwassenen, die zich meestal voordoet in de leeftijd van 20 tot 40 jaar. De momenteel geprefereerde klinische laboratoriumtest voor de diagnose is de detectie van oligoklonale banden (OCB's) in de cerebrospinale vloeistof (CSF) door iso-elektrische focusseringselektroforese (IEF) gevolgd door immunoblotting. Deze handmatige techniek vereist dat gepaarde CSF- en serumspecimens parallel worden uitgevoerd, met een subjectieve visuele interpretatie. De meerstapsmethode is arbeidsintensief en kostbaar, met een gemiddelde tijd voor analytische verwerking van meer dan 3 uur. Er is geen standaarddefinitie van OCB-hoeveelheden die nodig zijn voor een klinisch positief resultaat. Met verschillende benaderingen door verschillende instellingen kan positiviteit worden gekenmerkt door alles van 1 tot 4 unieke CSF-banden, wat de gevoeligheid en specificiteit van de test aanzienlijk beïnvloedt. Het meten van de niveaus van Kappa Free Light Chain (K-FLC) in CSF is voorgesteld als een mogelijk alternatief voor de kwalitatieve beoordeling van OCB's. Deze op het laboratorium gebaseerde validatiestudie zou het laboratorium in staat stellen om op uitgaven te besparen door de tijd van de technoloog te verkorten en dure IEF-kits te elimineren. Bovendien zou K-FLC subjectieve interpretatie vervangen door kwantitatieve waarden, waarmee de uitdagingen worden overwonnen die gepaard gaan met de prestaties en subjectieve interpretatie van OCB-testen. Het doel van deze studie is het valideren en bepalen van de diagnostische opbrengst van K-FLC in CSF tegen OCB's via IEF als gouden standaard.

OCB via IEF wordt routinematig uitgevoerd op de afdeling Chemische Pathologie voor patiënten met verdenking op MS of demyeliniserende aandoeningen. Er worden gepaarde CSF- en serumspecimens van de patiënt verzameld. De oligoklonale banden worden getest door IEF op agarosegel met behulp van Interlab diagnostics CSF IEF-kit en handmatige immunoblotting-stappen om de eiwitten op transfermembranen over te brengen. Simultane analyse wordt ook uitgevoerd op serummonsters. Het patroon van oligoklonale banden in CSF wordt beoordeeld door een patholoog en hun bevindingen worden genoteerd als positief of negatief voor de aanwezigheid of afwezigheid van CSF OCB of matching, dat wil zeggen banden die aanwezig zijn in zowel serum als CSF.

De monsters die gedurende de laatste 3 maanden van juni tot augustus voor OCBS via IEF zijn ontvangen, worden in het laboratorium bewaard in bevroren omstandigheden, stabiel voor analyse. 0,5 ml CSF-monster zal worden gebruikt voor analyse door middel van nefelometrie op een Beckman Immage-800-analysator met behulp van kits van Freelite, The Binding Site, volgens de instructies van de fabrikant.

Om de vertrouwelijkheid te waarborgen, worden alle identificatiegegevens geanonimiseerd en worden studie-ID's toegewezen. Bovendien worden alle gegevens door de PI opgeslagen in een met een wachtwoord beveiligd elektronisch formaat.

Gezien de lage verwachte frequentie van demyeliniserende aandoeningen in een enkel centrum; en om significante kracht en betrouwbaarheid van statistische analyse te bereiken, zal een minimale steekproefomvang van 60 CSF-monsters voor K-FLC-analyse worden opgenomen met stratificatie in 3 groepen: positief (n=20), negatief (n=20) en overeenkomend (n =20), voor OCB's.

Data-analyse zal worden gedaan op SPSS versie 25. Shapiro Wilk-test zal worden gebruikt om de normaliteit van gegevens te controleren. Diagnostische nauwkeurigheid van CSF K-FLC zal worden berekend op basis van gevoeligheid, specificiteit, PPV en NPV waarbij OCB als gouden standaard wordt genomen. Voor verdere analyse wordt de Receiver Operational Characteristic (ROC)-curve uitgezet voor OCB en wordt de oppervlakte onder de curve (AUC) berekend en wordt een optimale cut-off gegenereerd met behulp van Youden's Index. Voor de validatieovereenkomst tussen CSF L-FLC en IEF zal worden beoordeeld aan de hand van Cohen's kappa-statistieken.