Cadeia leve Kappa livre de CSF para o diagnóstico de distúrbios desmielinizantes

A esclerose múltipla (EM) é uma doença desmielinizante do sistema nervoso central (SNC) que comumente leva à incapacidade. É a doença neurológica incapacitante mais comum encontrada em adultos jovens, apresentando-se mais comumente entre as idades de 20 a 40 anos. O teste de laboratório clínico atualmente preferido para o diagnóstico é a detecção de bandas oligoclonais (OCBs) no líquido cefalorraquidiano (LCR) por eletroforese de focalização isoelétrica (IEF) seguida de imunotransferência. Esta técnica manual requer que amostras pareadas de LCR e soro sejam executadas em paralelo, com uma interpretação visual subjetiva. O método de várias etapas é trabalhoso e caro, com um tempo médio de processamento analítico de mais de 3 horas. Não há definição padrão de quantidades de OCB necessárias para um resultado clinicamente positivo. Com diferentes abordagens por diversas instituições, a positividade pode ser caracterizada por qualquer coisa de 1 a 4 bandas únicas de CSF, o que afeta significativamente a sensibilidade e a especificidade do ensaio. A medição dos níveis de Cadeia Leve Livre Kappa (K-FLC) no LCR foi proposta como uma alternativa potencial para a avaliação qualitativa de OCBs. Este estudo de validação baseado em laboratório permitiria ao laboratório cortar gastos reduzindo o tempo do tecnólogo e eliminando caros kits de IEF. Além disso, o K-FLC substituiria a interpretação subjetiva por valores quantitativos, superando os desafios associados ao desempenho e à interpretação subjetiva do teste OCB. O objetivo deste estudo é validar e determinar o rendimento diagnóstico de K-FLC no LCR contra OCBs via IEF como padrão-ouro.

OCB via IEF é realizado rotineiramente na Seção de Patologia Química para pacientes com suspeita de EM ou distúrbios desmielinizantes. As amostras pareadas de LCR e soro do paciente são coletadas. As bandas oligoclonais são testadas por IEF em gel de agarose usando o kit de diagnóstico CSF ​​IEF da Interlab e etapas manuais de imunoblotting para transferir as proteínas em membranas de transferência. A análise simultânea também é realizada em amostras de soro. O padrão de bandas oligoclonais no LCR é revisado pelo patologista e seus achados são anotados como positivos ou negativos para presença ou ausência de OCB no LCR ou correspondência, ou seja, bandas presentes tanto no soro quanto no LCR.

As amostras recebidas nos últimos 3 meses de junho a agosto para OCBS via IEF são armazenadas no laboratório em condições de congelamento, estáveis ​​para análise. A amostra de 0,5 ml de LCR será utilizada para análise por nefelometria no analisador Beckman Immage-800 utilizando kits da Freelite, The Binding Site, de acordo com as instruções do fabricante.

Para garantir a confidencialidade, todos os detalhes de identificação serão anonimizados e os identificadores do estudo serão atribuídos. Além disso, todos os dados serão armazenados em um formato eletrônico protegido por senha pelo PI.

Tendo em vista a baixa frequência prevista de distúrbios desmielinizantes em um único centro; e para obter poder e confiabilidade significativos da análise estatística, um tamanho mínimo de amostra de 60 amostras de LCR para análise K-FLC será incluído com estratificação em 3 grupos: Positivo (n = 20), negativo (n = 20) e correspondente (n =20), para OCBs.

A análise dos dados será feita no SPSS versão 25. O teste de Shapiro Wilk será utilizado para verificar a normalidade dos dados. A precisão diagnóstica do CSF ​​K-FLC será calculada com base na sensibilidade, especificidade, PPV e NPV, tomando OCB como padrão-ouro. Para análise posterior, a curva característica operacional do receptor (ROC) será plotada para OCB e a área sob a curva (AUC) será calculada e o corte ideal será gerado usando o índice de Youden. Para o acordo de validação entre CSF L-FLC e IEF será avaliado pelas estatísticas kappa de Cohen.