Cadena ligera kappa libre de LCR para el diagnóstico de trastornos desmielinizantes

La esclerosis múltiple (EM) es una enfermedad desmielinizante del sistema nervioso central (SNC) que comúnmente conduce a la discapacidad. Es la enfermedad neurológica incapacitante más común que se encuentra en adultos jóvenes, y se presenta con mayor frecuencia entre las edades de 20 a 40 años. La prueba de laboratorio clínico preferida actualmente para el diagnóstico es la detección de bandas oligoclonales (OCB) en el líquido cefalorraquídeo (LCR) mediante electroforesis de enfoque isoeléctrico (IEF) seguida de inmunotransferencia. Esta técnica manual requiere que las muestras de LCR y suero se analicen en paralelo, con una interpretación visual subjetiva. El método de múltiples pasos requiere mucha mano de obra y es costoso, con un tiempo promedio para el procesamiento analítico de más de 3 horas. No existe una definición estándar de las cantidades de OCB requeridas para un resultado clínicamente positivo. Con diferentes enfoques de diversas instituciones, la positividad se puede caracterizar por cualquier cosa, desde 1 a 4 bandas únicas de LCR, lo que afecta significativamente la sensibilidad y la especificidad del ensayo. La medición de los niveles de cadena ligera libre kappa (K-FLC) en LCR se ha propuesto como una posible alternativa a la evaluación cualitativa de OCB. Este estudio de validación basado en el laboratorio permitiría al laboratorio reducir los gastos al reducir el tiempo del tecnólogo y eliminar los costosos kits IEF. Además, K-FLC reemplazaría la interpretación subjetiva con valores cuantitativos, superando los desafíos asociados con el rendimiento y la interpretación subjetiva de las pruebas OCB. El objetivo de este estudio es validar y determinar el rendimiento diagnóstico de K-FLC en LCR frente a OCB a través de IEF como estándar de oro.

La OCB vía IEF se realiza de forma rutinaria en la Sección de Patología Química para pacientes con sospecha de EM o trastornos desmielinizantes. Se recolectan especímenes de LCR y suero de pacientes emparejados. Las bandas oligoclonales se analizan mediante IEF en gel de agarosa utilizando el kit IEF CSF de Interlab Diagnostics y pasos de inmunotransferencia manual para transferir las proteínas a las membranas de transferencia. También se realizan análisis simultáneos en muestras de suero. El patólogo revisa el patrón de bandas oligoclonales en el LCR y sus hallazgos se anotan como positivos o negativos para la presencia o ausencia de OCB en el LCR o coincidencia, es decir, bandas presentes tanto en el suero como en el LCR.

Las muestras recibidas durante los últimos 3 meses de junio a agosto para OCBS vía IEF se guardan en el laboratorio en condiciones de congelación, estables para su análisis. Se utilizará una muestra de LCR de 0,5 ml para el análisis por nefelometría en el analizador Beckman Immage-800 utilizando kits de Freelite, The Binding Site, de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

Para garantizar la confidencialidad, todos los detalles de identificación se anonimizarán y se asignarán identificadores de estudio. Además, todos los datos serán almacenados en un formato electrónico protegido por contraseña por el PI.

Teniendo en cuenta la baja frecuencia prevista de trastornos desmielinizantes en un solo centro; y para lograr un poder y confiabilidad significativos del análisis estadístico, se incluirá un tamaño de muestra mínimo de 60 muestras de LCR para el análisis K-FLC con estratificación en 3 grupos: Positivo (n = 20), negativo (n = 20) y emparejamiento (n =20), para OCB.

El análisis de datos se realizará en SPSS versión 25. Se utilizará la prueba de Shapiro Wilk para comprobar la normalidad de los datos. La precisión diagnóstica de CSF K-FLC se calculará sobre la base de la sensibilidad, la especificidad, el VPP y el VPN tomando OCB como estándar de oro. Para un análisis más detallado, se trazará la curva característica operativa del receptor (ROC) para OCB y se calculará el área bajo la curva (AUC) y se generará el corte óptimo utilizando el índice de Youden. Para el acuerdo de validación entre CSF L-FLC e IEF se evaluará mediante las estadísticas kappa de Cohen.