Cinétique du rétinol et du TBS chez les femmes sénégalaises allaitantes vivant en milieu urbain et relation entre leur TBS et celui de leurs nourrissons (TBS)

Les objectifs spécifiques sont :

Pour déterminer le transfert du traceur dans le lait maternel Pour déterminer le coefficient composite (FaS) à l'aide d'une modélisation mathématique Pour estimer le TBS à l'aide des coefficients générés et de l'équation RID chez les mères Pour estimer le TBS du rétinol du lait maternel à l'aide de l'équation du bilan massique chez les mères Pour estimer le TBS à partir de rétinol sérique à l'aide de l'équation du bilan de masse chez les mères et leurs enfants. TBS des enfants selon leur statut Évaluer les apports alimentaires en vitamine A chez les couples mère-enfant

L'étude est conçue selon un "modèle Wonder women". Il sera mis en œuvre dans la ville de Dakar. Au total, cinquante-six (56) paires mère-enfant en lactation seront incluses dans l'étude. Les femmes seront réparties en 8 groupes de 7 femmes chacun. Cette taille d'échantillon inclut un taux d'attrition de 15 %.

Au départ (jour 0), des échantillons de sang seront prélevés sur toutes les femmes après une nuit de jeûne. Les femmes seront également invitées à donner des échantillons de lait occasionnels. Ensuite, chaque femme recevra une dose orale de 2,0 μmol d'acétate de 13C2-rétinyle (Gannon et al., 2014; Kaliwile et al., 2021). Ensuite, les participants consommeront une collation à base de beurre de cacahuète pour fournir de la graisse afin d'améliorer l'absorption de la dose. Les femmes auront également un échantillon de suivi prélevé au jour 14. Comme référence, un échantillon de lait de suivi sera prélevé. L'échantillonnage à court terme du sang et du lait aura lieu entre les jours 0 et 14 et entre les jours 14 et 109. Au total, chaque femme aura 4 échantillons de sang et 4 échantillons de lait prélevés au fil du temps.

Pour les nourrissons, le test RID commencera au jour 14. Après le sang de référence, ils recevront 1,0 μmol d'acétate de 13C2-rétinyle et auront un deuxième échantillon de sang au jour 28. Ainsi, les nourrissons auront 2 échantillons de sang.

Le protocole sera expliqué à la mère et un consentement écrit sera obtenu de sa part. Les couples mère-nourrisson en lactation seront vermifugés avant de commencer le protocole de recherche.

Les échantillons de sang seront protégés de la lumière avec du papier d'aluminium et centrifugés à 3500 tr/min pendant 15 minutes pour séparer le sérum du caillot. Toutes les centrifugations seront effectuées dans l'heure suivant le prélèvement sanguin et à l'aide d'une centrifugeuse. Le sérum sera aliquoté dans des flacons cryogéniques stériles et conservé à -80 °C au laboratoire.

Concernant les échantillons de lait, 2 aliquots seront préparés dans 2 cryovials et conservés à +4°C au champ et à -80°C au laboratoire.

Un questionnaire administré par un enquêteur permettra de collecter des informations de base et des données alimentaires auprès de paires mère-enfant. Les apports alimentaires des couples mère-enfant seront évalués à l'aide de 2 rappels alimentaires quantitatifs de 24 heures sur des jours non consécutifs (FAO, 2018). La diversité alimentaire minimale pour les femmes (MDD-W) sera également déterminée à partir des rappels alimentaires de 24 heures. Pour les enfants, les indicateurs des pratiques d'alimentation du nourrisson et du jeune enfant seront évalués conformément aux dernières recommandations de l'OMS/UNICEF (OMS/UNICEF, 2021).

Des mesures anthropométriques seront effectuées pour évaluer l'état nutritionnel des couples mère-enfant selon les procédures standard.

Analyse d'échantillon :

La concentration sérique de rétinol sera effectuée par HPLC. L'abondance naturelle de 13C dans le sérum et le lait sera mesurée par chromatographie en phase gazeuse-combustion-spectrométrie de masse à rapport isotopique (GC-C-IRMS). La CRP et l'AGP seront mesurées par l'analyseur automatique Biosystems A15. Les esters de rétinyle et les caroténoïdes sériques seront réalisés par chromatographie liquide ultra-performante (UPLC).

L'anémie sera évaluée en mesurant l'hémoglobine (Hb) dans le sang total à l'aide d'un système HemoCue (Hb-301) et le dépistage du paludisme sera effectué à l'aide des tests SD BIOLINE Malaria Antigen P.f/Pan1.

Une analyse plus approfondie sera effectuée sur des échantillons de salive dans un sous-échantillon de paire mère-enfant pour mesurer la production de lait par la méthode de dilution isotopique du deutérium à la dose mère. L'enrichissement en deutérium des échantillons de salive sera mesuré avec un spectromètre infrarouge à transformée de Fourier (FTIR Shimadzu IR Affinity, Kyoto, Japon).

Modélisation de la cinétique du rétinol chez les mères :

Les concentrations de rétinol dans le sérum et le lait maternel et les données d'enrichissement isotopique seront utilisées pour générer des ensembles de données sur les super femmes. L'analyse compartimentale basée sur un modèle sera appliquée aux données de traceurs isotopiques des super-femmes pour l'enrichissement du sérum et du lait maternel à l'aide de modèles établis pour le métabolisme de la vitamine A (Green et al., 2020 ; Gannon et al., 2018) et en élargissant ces modèles pour intégrer le transfert de traceurs au lait maternel.

Détermination des facteurs Fa et S :

Les résultats de l'analyse compartimentale basée sur un modèle comprennent des estimations des taux de transfert de vitamine A entre les compartiments physiologiques et les résultats du modèle qui en résultent ; masse totale tracée, demi-vie, vitesse catabolique fractionnée, vitesse d'élimination, temps d'équilibrage et répartition sérum/traceur corporel (facteur S). En utilisant des hypothèses d'absorption, la quantité de dose de traceur absorbée et stockée au moment de l'échantillonnage (liée au facteur Fa et à d'autres coefficients d'équation connexes) sera déterminée.

Calcul du TBS :

Équation du bilan massique : le rapport isotopique traceur/tracé (TTR) (rétinol non marqué) dans le sérum sera utilisé pour estimer les réserves corporelles totales d'AV (TBS) en utilisant l'équation suivante avec les hypothèses appropriées :

TBS (μmol)= a × 1/TTR× (facteurs de correction de l'absorption et du stockage) a est la quantité de dose Équation RID : TBS (μmol)= Fa × S × (1/〖SAp〗) Fa est la fraction de la dose orale de traceur absorbée et retenue dans les réserves S est le rapport de l'activité spécifique du rétinol (rétinol marqué/rétinol non marqué) dans le plasma à celle dans le foie après équilibrage de la dose SAp est l'activité spécifique du rétinol (rétinol marqué/rétinol non marqué) dans le plasma .

Pour les mères, Fa et S seront calculés à l'aide d'une modélisation mathématique tandis que SAp sera déterminé analytiquement. Chez les enfants, des valeurs génériques pour Fa et S seront utilisées.

Analyses statistiques:

La saisie des données et le contrôle de la qualité seront effectués à l'aide d'Epi infoTM 7.2.3.1, Epi infoTM 3.5.1 (Centers for Disease Control and Prevention) et Microsoft Excel 2016 (Microsoft Corporation). L'analyse statistique sera effectuée à l'aide de STATA/SE 14.0 (STATA Corporation). L'analyse descriptive sera utilisée pour mettre en tableau les caractéristiques de la population étudiée. Les variables catégorielles seront exprimées en pourcentages et les variables continues en moyenne ± SD pour les variables normalement distribuées et en médiane avec intervalle interquartile pour les valeurs asymétriques. Le test t de Student bilatéral, le test t apparié ou l'analyse de variance unidirectionnelle (ANOVA) suivis des tests de comparaison post-hoc de Bonferroni seront utilisés pour comparer les moyennes tandis que le test de somme des rangs de Wilcoxon sera utilisé pour comparer les médianes. Le test du chi carré de Pearson, le test exact de Fisher ou le test du chi carré de McNemar seront utilisés pour comparer les pourcentages. Des tests de concordance appropriés seront effectués. Toutes les étapes de l'analyse statistique seront effectuées par un statisticien expérimenté utilisant une méthodologie appropriée pour garantir des résultats appropriés et fiables.