Kinetik von Retinol und TBS bei stillenden senegalesischen Frauen, die in einer städtischen Umgebung leben, und die Beziehung zwischen ihrer TBS und der ihrer Säuglinge (TBS)

Konkrete Ziele sind:

Zur Bestimmung des Tracertransfers in die Muttermilch Zur Bestimmung des zusammengesetzten Koeffizienten (FaS) unter Verwendung mathematischer Modellierung Zur Abschätzung von TBS unter Verwendung der generierten Koeffizienten und der RID-Gleichung bei Müttern Zur Abschätzung von TBS aus Muttermilch-Retinol unter Verwendung der Massenbilanzgleichung bei Müttern Zur Abschätzung von TBS aus Serum-Retinol unter Verwendung der Massenbilanzgleichung zwischen Müttern und ihren Kindern Bewertung der Übereinstimmung zwischen TBS, gemessen mit verschiedenen Methoden (die RID-Gleichung, die Massenbilanzgleichung unter Verwendung von aus Serum oder Muttermilch gewonnenem Retinol) unter Müttern Bewertung der Beziehung zwischen Müttern und TBS von Kindern entsprechend ihrem Status Bewertung der Nahrungsaufnahme von Vitamin A bei Mutter-Kind-Paaren

Die Studie ist nach einem „Wonder-Women-Modell“ konzipiert. Es wird in der Stadt Dakar implementiert. Insgesamt werden sechsundfünfzig (56) stillende Mutter-Kind-Paare in die Studie aufgenommen. Die Frauen werden in 8 Gruppen zu je 7 Frauen eingeteilt. Diese Stichprobengröße beinhaltet eine Fluktuationsrate von 15 %.

An der Grundlinie (Tag 0) werden Blutproben von allen Frauen nach einem Fasten über Nacht erhalten. Frauen werden auch gebeten, gelegentlich Milchproben zu geben. Anschließend erhält jede Frau eine orale Dosis von 2,0 μmol 13C2 -Retinylacetat (Gannon et al., 2014; Kaliwile et al., 2021). Danach konsumieren die Teilnehmer einen Snack auf Erdnussbutterbasis, um Fett bereitzustellen, um die Dosisabsorption zu verbessern. Den Frauen wird am 14. Tag auch eine Nachuntersuchungsprobe entnommen. Wie bei der Grundlinie wird eine Folgemilchprobe gesammelt. Zwischen den Tagen 0 und 14 und zwischen den Tagen 14 und 109 finden kurzfristige Blut- und Milchprobenentnahmen statt. Insgesamt werden jeder Frau im Laufe der Zeit 4 Blut- und 4 Milchproben entnommen.

Für Kleinkinder beginnt die RID-Prüfung am 14. Tag. Nach dem Ausgangsblut erhalten sie 1,0 μmol 13C2-Retinylacetat und erhalten an Tag 28 eine zweite Blutprobe. Säuglinge haben also 2 Blutproben.

Das Protokoll wird der Mutter erklärt und eine schriftliche Zustimmung von ihr eingeholt. Stillende Mutter-Kind-Paare werden vor Beginn des Forschungsprotokolls entwurmt.

Die Blutproben werden mit Aluminiumfolie vor Licht geschützt und 15 Minuten lang bei 3500 U/min zentrifugiert, um das Serum vom Gerinnsel zu trennen. Alle Zentrifugationen werden in der Stunde nach der Blutentnahme unter Verwendung einer Zentrifuge durchgeführt. Das Serum wird in sterile Kryoröhrchen aliquotiert und bei -80 °C im Labor gelagert.

Bei Milchproben werden 2 Aliquots in 2 Kryoröhrchen vorbereitet und bei +4 °C im Feld und bei -80 °C im Labor gelagert.

Ein vom Interviewer verwalteter Fragebogen ermöglicht das Sammeln von Hintergrundinformationen und Ernährungsdaten von Mutter-Kind-Paaren. Die Nahrungsaufnahme von Mutter-Kind-Paaren wird anhand von 2 quantitativen 24-Stunden-Ernährungsrückrufen an nicht aufeinanderfolgenden Tagen bewertet (FAO, 2018). Die minimale Ernährungsvielfalt für Frauen (MDD-W) wird ebenfalls aus den 24-Stunden-Ernährungsrückrufen bestimmt. Für Kinder werden die Indikatoren für die Ernährungspraktiken von Säuglingen und Kleinkindern gemäß den neuesten Empfehlungen der WHO/UNICEF (WHO/UNICEF, 2021) bewertet.

Anthropometrische Messungen werden durchgeführt, um den Ernährungszustand von Mutter-Kind-Paaren nach Standardverfahren zu bewerten.

Probenanalyse:

Die Serum-Retinol-Konzentration wird durch HPLC durchgeführt. Die natürliche Häufigkeit von 13C in Serum und Milch wird durch Gaschromatographie-Verbrennungs-Isotopenverhältnis-Massenspektrometrie (GC-C-IRMS) gemessen. CRP und AGP werden mit dem automatischen Analysegerät Biosystems A15 gemessen. Retinylester und Serumcarotinoide werden durch Ultra-Performance Liquid Chromatography (UPLC) bestimmt.

Die Anämie wird durch Messung des Hämoglobins (Hb) im Vollblut mit einem HemoCue-System (Hb-301) beurteilt, und Malariatests werden mit SD BIOLINE Malaria Antigen P.f/Pan1-Tests durchgeführt.

Weitere Analysen werden an Speichelproben in einer Teilprobe des Mutter-Kind-Paares durchgeführt, um die Milchproduktion durch die Mutterdosis-Deuterium-Isotopen-Verdünnungsmethode zu messen. Die Deuteriumanreicherung von Speichelproben wird mit einem Fourier-Transformations-Infrarotspektrometer (FTIR Shimadzu IR Affinity, Kyoto, Japan) gemessen.

Modellierung der Retinolkinetik bei Müttern:

Retinolkonzentrationen in Serum und Muttermilch sowie Isotopenanreicherungsdaten werden verwendet, um Superfrauen-Datensätze zu generieren. Die modellbasierte Kompartimentanalyse wird auf Superfrauen-Isotopen-Tracer-Daten für die Anreicherung von Serum und Muttermilch angewendet, wobei etablierte Modelle für den Vitamin-A-Stoffwechsel (Green et al., 2020; Gannon et al., 2018) verwendet und diese Modelle um den Tracer-Transfer erweitert werden zur Muttermilch.

Bestimmung von Fa- und S-Faktoren:

Zu den Ergebnissen der modellbasierten Kompartimentanalyse gehören Schätzungen der Vitamin-A-Übertragungsraten zwischen physiologisch basierten Kompartimenten und die daraus resultierenden Modellergebnisse; nachweisbare Gesamtmasse, Halbwertszeit, fraktionierte Abbaurate, Entsorgungsrate, Äquilibrierungszeit und Serum/Körper-Tracer-Verteilung (Faktor S). Unter Verwendung von Absorptionsannahmen wird die zum Zeitpunkt der Probenahme absorbierte und gespeicherte Tracerdosis (bezogen auf den Faktor Fa und andere zugehörige Gleichungskoeffizienten) bestimmt.

TBS-Berechnung:

Massenbilanzgleichung: Das Isotopenverhältnis von Tracer zu Tracee (TTR) (unmarkiertes Retinol) im Serum wird verwendet, um die Gesamtkörper-VA-Speicher (TBS) unter Verwendung der folgenden Gleichung mit geeigneten Annahmen abzuschätzen:

TBS (μmol)= a × 1/TTR× (Faktoren zur Korrektur von Absorption und Speicherung) a ist die Dosismenge RID-Gleichung: TBS (μmol)= Fa × S × (1/〖SAp〗) Fa ist der Bruchteil der orale Tracer-Dosis, die absorbiert und in den Speichern zurückgehalten wird S ist das Verhältnis der spezifischen Aktivität von Retinol (markiertes Retinol/unmarkiertes Retinol) im Plasma zu der in der Leber nach Dosisausgleich. SAp ist die spezifische Aktivität von Retinol (markiertes Retinol/unmarkiertes Retinol) im Plasma .

Für Mütter werden Fa und S unter Verwendung mathematischer Modelle berechnet, während SAP analytisch bestimmt wird. Bei Kindern werden generische Werte für Fa und S verwendet.

Statistische Analyse:

Dateneingabe und Qualitätskontrolle werden mit Epi infoTM 7.2.3.1 durchgeführt, Epi infoTM 3.5.1 (Centers for Disease Control and Prevention) und Microsoft Excel 2016 (Microsoft Corporation). Die statistische Analyse wird unter Verwendung von STATA/SE 14.0 (STATA Corporation) durchgeführt. Die beschreibende Analyse wird verwendet, um die Merkmale der Studienpopulation tabellarisch darzustellen. Kategoriale Variablen werden als Prozentsätze und kontinuierliche Variablen als Mittelwert ± SD für normalverteilte Variablen und Median mit Interquartilbereich für schiefe Werte ausgedrückt. Der zweiseitige Student-t-Test, der gepaarte t-Test oder die einseitige Varianzanalyse (ANOVA), gefolgt von Post-hoc-Vergleichstests von Bonferroni, werden verwendet, um Mittelwerte zu vergleichen, während der Wilcoxon-Rangsummentest verwendet wird, um Mediane zu vergleichen. Der Chi-Quadrat-Test nach Pearson, der exakte Test nach Fisher oder der Chi-Quadrat-Test nach McNemar werden verwendet, um Prozentsätze zu vergleichen. Entsprechende Übereinstimmungstests werden durchgeführt. Alle Phasen der statistischen Analyse werden von einem erfahrenen Statistiker unter Verwendung geeigneter Methoden durchgeführt, um korrekte und zuverlässige Ergebnisse zu gewährleisten.