Kinetik af retinol og TBS blandt ammende senegalesiske kvinder, der bor i bymiljøer og forholdet mellem deres TBS og deres spædbørn (TBS)

Specifikke mål er:

At bestemme overførsel af sporstof til modermælk At bestemme den sammensatte koefficient (FaS) ved hjælp af matematisk modellering At estimere TBS ved hjælp af de genererede koefficienter og RID-ligningen blandt mødre At estimere TBS fra modermælksretinol ved hjælp af massebalanceligningen blandt mødre At estimere TBS fra serumretinol ved hjælp af massebalanceligningen blandt mødre og deres børn At vurdere overensstemmelsen mellem TBS målt ved forskellige metoder (RID-ligningen, massebalanceligningen ved hjælp af serum eller modermælksafledt retinol) blandt mødre At evaluere forholdet mellem mødres og børns TBS efter deres status At vurdere kostens indtag af vitamin A blandt mor-barn-par

Undersøgelsen er designet efter en "Wonder women model". Det vil blive implementeret i Dakar by. I alt seksoghalvtreds (56) ammende mor-barn-par vil blive inkluderet i undersøgelsen. Kvinderne vil blive opdelt i 8 grupper på hver 7 kvinder. Denne stikprøvestørrelse inkluderer en nedslidningsrate på 15 %.

Ved baseline (dag 0) vil der blive taget blodprøver fra alle kvinder efter faste natten over. Kvinder vil også blive bedt om at give afslappede mælkeprøver. Derefter vil hver kvinde få en oral dosis på 2,0 μmol 13C2-retinylacetat (Gannon et al., 2014; Kaliwile et al., 2021). Bagefter vil deltagerne indtage en jordnøddesmør-baseret snack for at give fedt for at forbedre dosisabsorptionen. Kvinderne får også taget en opfølgende prøve på dag 14. Hvad angår baseline, vil en opfølgende mælkeprøve blive indsamlet. Kortvarig prøvetagning af både blod og mælk vil finde sted mellem dag 0 og 14 og mellem dag 14 og 109. I alt vil hver kvinde få udtaget 4 blod- og 4 mælkeprøver over tid.

For spædbørn starter RID-testen på dag 14. Efter baseline-blodet vil de modtage 1,0 μmol 13C2-retinylacetat og vil have en anden blodprøve på dag 28. Spædbørn vil således have 2 blodprøver.

Protokollen vil blive forklaret moderen, og der vil blive indhentet skriftligt samtykke fra hende. Ammende mor-spædbarn par vil blive ormekur før start af forskningsprotokollen.

Blodprøverne vil blive beskyttet mod lys med aluminiumsfolie og centrifugeret ved 3500 rpm i 15 minutter for at adskille serum fra koagel. Alle centrifugeringer vil blive udført i timen efter blodprøvetagningen og ved hjælp af en centrifuge. Serumet opdeles i sterile kryogene hætteglas og opbevares ved -80 °C i laboratoriet.

Vedrørende mælkeprøver vil 2 portioner blive tilberedt i 2 kryoglas og opbevaret ved +4°C i marken og ved -80°C i laboratoriet.

Et spørgeskema administreret af intervieweren vil tillade indsamling af baggrundsinformation og kostdata fra mor-spædbarn-par. Diætindtag af mor-spædbarn-par vil blive vurderet ved hjælp af 2 kvantitative 24-timers kosttilbagekaldelser på ikke-konsekutive dage (FAO, 2018). Minimumsdiætdiversiteten for kvinder (MDD-W) vil også blive bestemt ud fra de 24-timers kosttilbagekaldelser. For børn vil indikatorer for fodringspraksis for spædbørn og småbørn blive vurderet efter de seneste WHO/UNICEF-anbefalinger (WHO/UNICEF, 2021).

Antropometriske målinger vil blive udført for at evaluere ernæringsstatus for mor-spædbarn par i henhold til standardprocedurer.

Prøveanalyse:

Serum Retinol koncentration vil blive foretaget ved HPLC. Naturlig forekomst af 13C i serum og mælk vil blive målt ved gaskromatografi-forbrænding-isotopforhold massespektrometri (GC-C-IRMS). CRP og AGP vil blive målt af Biosystems A15 automatisk analysator. Retinylestere og serumcarotenoider vil blive udført ved Ultra-Performance Liquid Chromatography (UPLC).

Anæmi vil blive vurderet ved at måle hæmoglobin (Hb) i fuldblod ved hjælp af et HemoCue-system (Hb-301), og malariatest vil blive udført ved hjælp af SD BIOLINE Malaria Antigen P.f/Pan1-test.

Yderligere analyse vil blive udført på spytprøver i en delprøve af mor-barn-par for at måle mælkeproduktion ved moder-dosis deuterium isotopfortyndingsmetoden. Deuteriumberigelse af spytprøver vil blive målt med et Fourier transform infrarødt spektrometer (FTIR Shimadzu IR Affinity, Kyoto, Japan).

Modellering af retinolkinetik blandt mødre:

Serum- og modermælksretinolkoncentrationer og isotopberigelsesdata vil blive brugt til at generere superkvinder-datasæt. Modelbaseret kompartmentanalyse vil blive anvendt på superkvinders isotopsporingsdata for serum- og modermælksberigelse ved hjælp af etablerede modeller for vitamin A-metabolisme (Green et al., 2020; Gannon et al., 2018) og udvide disse modeller til at inkorporere sporstofoverførsel til modermælk.

Bestemmelse af Fa- og S-faktorer:

Output fra den modelbaserede kompartmentanalyse inkluderer estimater for vitamin A-overførselshastigheder mellem fysiologisk baserede rum og de resulterende modelresultater; total sporet masse, halveringstid, fraktioneret katabolisk hastighed, bortskaffelseshastighed, ækvilibreringstid og serum/kropssporfordeling (faktor S). Ved hjælp af absorptionsantagelser vil mængden af ​​sporstofdosis absorberet og opbevaret på prøveudtagningstidspunktet (relateret til faktor Fa og andre relaterede ligningskoefficienter) blive bestemt.

TBS beregning:

Massebalanceligning: Isotopforholdet mellem sporstof og spor (TTR) (umærket retinol) i serum vil blive brugt til at estimere totale krops VA-lagre (TBS) ved hjælp af følgende ligning med passende antagelser:

TBS (μmol)= a × 1/TTR× (faktorer til korrektion af absorption og opbevaring) a er dosismængden RID-ligning: TBS (μmol)= Fa × S × (1/〖SAp〗) Fa er brøkdelen af oral sporstofdosis absorberet og opbevaret i lagrene S er forholdet mellem den specifikke aktivitet af retinol (mærket retinol/umærket retinol) i plasma og den i leveren efter dosisækvilibrering. SAp er den specifikke aktivitet af retinol (mærket retinol/umærket retinol) i plasma .

For mødre vil Fa og S blive beregnet ved hjælp af matematisk modellering, mens SAp vil blive analytisk bestemt. Blandt børn vil generiske værdier for Fa og S blive brugt.

Statistisk analyse:

Dataindtastning og kvalitetskontrol vil blive udført ved hjælp af Epi infoTM 7.2.3.1, Epi infoTM 3.5.1 (Centers for Disease Control and Prevention) og Microsoft Excel 2016 (Microsoft Corporation). Statistisk analyse vil blive udført ved brug af STATA/SE 14.0 (STATA Corporation). Deskriptiv analyse vil blive brugt til at tabulere undersøgelsespopulationens karakteristika. Kategoriske variable vil blive udtrykt som procenter, og kontinuerte variable vil blive udtrykt som middelværdi ± SD for normalfordelte variable og median med interkvartilområde for skæve værdier. Two-tailed Student's t-test, Paired t-test eller en-vejs variansanalyse (ANOVA) efterfulgt af Bonferronis post-hoc sammenligningstest vil blive brugt til at sammenligne gennemsnit, mens Wilcoxon rank-sum test vil blive brugt til at sammenligne medianer. Pearsons chi-kvadrat-test, Fishers eksakte test eller McNemars chi-kvadrat-test vil blive brugt til at sammenligne procenter. Der vil blive udført passende aftaletest. Alle de statistiske analysefaser vil blive udført af en erfaren statistiker ved hjælp af passende metodologi for at sikre korrekte og pålidelige resultater.