Kinetikk av retinol og TBS blant ammende senegalesiske kvinner som bor i urbane omgivelser og forholdet mellom deres TBS og de til spedbarnene deres (TBS)

Spesifikke mål er:

For å bestemme overføring av sporstoff til morsmelk For å bestemme den sammensatte koeffisienten (FaS) ved hjelp av matematisk modellering For å estimere TBS ved å bruke de genererte koeffisientene og RID-ligningen blant mødre For å estimere TBS fra morsmelk retinol ved å bruke massebalanseligningen blant mødre For å estimere TBS fra serumretinol ved bruk av massebalanseligningen blant mødre og deres barn For å vurdere samsvaret mellom TBS målt ved forskjellige metoder (RID-ligningen, massebalanseligningen ved bruk av serum eller morsmelkavledet retinol) blant mødre For å evaluere forholdet mellom mødres og barns TBS i henhold til deres status For å vurdere diettinntak av vitamin A blant mor-barn-par

Studiet er designet etter en "Wonder women model". Det vil bli implementert i Dakar by. Totalt femtiseks (56) ammende mor-barn-par vil bli inkludert i studien. Kvinnene vil bli delt inn i 8 grupper på 7 kvinner hver. Denne prøvestørrelsen inkluderer en avgang på 15 %.

Ved baseline (dag 0) vil det bli tatt blodprøver fra alle kvinnene etter faste over natten. Kvinner vil også bli bedt om å gi tilfeldige melkeprøver. Deretter vil hver kvinne få en oral dose på 2,0 μmol 13C2-retinylacetat (Gannon et al., 2014; Kaliwile et al., 2021). Etterpå vil deltakerne innta en peanøttsmørbasert snack for å gi fett for å forbedre doseabsorpsjonen. Kvinnene vil også få tatt oppfølgingsprøve på dag 14. Når det gjelder baseline, vil en oppfølgende melkeprøve bli samlet inn. Kortvarig prøvetaking av både blod og melk vil skje mellom dag 0 og 14 og mellom dag 14 og 109. Totalt vil hver kvinne få tatt 4 blod- og 4 melkeprøver over tid.

For spedbarn vil RID-testen starte på dag 14. Etter baseline-blodet vil de motta 1,0 μmol 13C2-retinylacetat og vil ha en ny blodprøve på dag 28. Dermed vil spedbarn ha 2 blodprøver.

Protokollen vil bli forklart til mor og skriftlig samtykke innhentes fra henne. Ammende mor-spedbarn-par vil bli ormekur før oppstart av forskningsprotokollen.

Blodprøvene vil bli beskyttet mot lys med aluminiumsfolie og sentrifugert ved 3500 rpm i 15 minutter for å skille serum fra koagel. Alle sentrifugeringer vil bli utført i timen etter blodprøvetakingen og ved hjelp av en sentrifuge. Serumet vil bli delt opp i sterile kryogene ampuller og lagret ved -80 °C på laboratoriet.

Når det gjelder melkeprøver, vil det bli tilberedt 2 alikvoter i 2 kryovials og lagret ved +4°C i felt og ved -80°C på laboratoriet.

Et intervjuer-administrert spørreskjema vil tillate innsamling av bakgrunnsinformasjon og kostholdsdata fra mor-spedbarn-par. Kostinntak av mor-spedbarn-par vil bli vurdert ved å bruke 2 kvantitative 24-timers dietttilbakekallinger på ikke-påfølgende dager (FAO, 2018). Minimum Dietary Diversity for Women (MDD-W) vil også bli bestemt ut fra 24-timers diettinnkallingene. For barn vil indikatorer for fôringspraksis for spedbarn og småbarn bli vurdert i henhold til de siste WHO/UNICEF-anbefalingene (WHO/UNICEF, 2021).

Antropometriske målinger vil bli utført for å evaluere ernæringsstatusen til mor-spedbarn-par i henhold til standardprosedyrer.

Prøveanalyse:

Serumretinolkonsentrasjon vil bli utført ved HPLC. Naturlig forekomst av 13C i serum og melk vil bli målt ved gasskromatografi-forbrenning-isotopforhold massespektrometri (GC-C-IRMS). CRP og AGP vil bli målt av Biosystems A15 automatisk analysator. Retinylestere og serumkarotenoider vil bli utført med Ultra-Performance Liquid Chromatography (UPLC).

Anemi vil bli vurdert ved å måle hemoglobin (Hb) i fullblod ved hjelp av et HemoCue-system (Hb-301) og malariatesting vil bli utført ved bruk av SD BIOLINE Malaria Antigen P.f/Pan1-tester.

Ytterligere analyse vil bli gjort på spyttprøver i en delprøve av mor-barn-par for å måle melkeproduksjon ved mor-dose deuterium-isotopfortynningsmetoden. Deuteriumanrikning av spyttprøver vil bli målt med et Fourier transform infrarødt spektrometer (FTIR Shimadzu IR Affinity, Kyoto, Japan).

Modellering av retinolkinetikk blant mødre:

Serum og morsmelk retinolkonsentrasjoner og isotopanrikningsdata vil bli brukt til å generere datasett for superkvinner. Modellbasert kompartmentanalyse vil bli brukt på superkvinners isotopsporerdata for serum- og morsmelkberikelse ved å bruke etablerte modeller for vitamin A-metabolisme (Green et al., 2020; Gannon et al., 2018) og utvide disse modellene til å inkludere sporstoffoverføring til morsmelk.

Bestemmelse av Fa- og S-faktorer:

Utdata fra den modellbaserte avdelingsanalysen inkluderer estimater for vitamin A-overføringshastigheter mellom fysiologisk baserte avdelinger og de resulterende modellresultatene; total sporet masse, halveringstid, fraksjonert katabolsk hastighet, deponeringshastighet, ekvilibreringstid og serum/kroppssporfordeling (faktor S). Ved å bruke absorpsjonsforutsetninger vil mengden sporstoffdose som absorberes og lagres ved prøvetakingstidspunktet (relatert til faktor Fa og andre relaterte ligningskoeffisienter) bestemmes.

TBS-beregning:

Massebalanseligning: Isotopforholdet mellom sporstoff og spor (TTR) (umerket retinol) i serum vil bli brukt til å estimere totale kroppens VA-lagre (TBS) ved å bruke følgende ligning med passende forutsetninger:

TBS (μmol)= a × 1/TTR× (faktorer for korreksjon av absorpsjon og lagring) a er dosemengden RID-ligning: TBS (μmol)= Fa × S × (1/〖SAp〗) Fa er brøkdelen av oral sporstoffdose absorbert og beholdt i lagre S er forholdet mellom den spesifikke aktiviteten til retinol (merket retinol/umerket retinol) i plasma og den i leveren etter doseekvilibrering. SAp er den spesifikke aktiviteten til retinol (merket retinol/umerket retinol) i plasma .

For mødre vil Fa og S beregnes ved hjelp av matematisk modellering mens SAp vil bli analytisk bestemt. Blant barn vil generiske verdier for Fa og S bli brukt.

Statistisk analyse:

Datainntasting og kvalitetskontroll vil bli utført ved hjelp av Epi infoTM 7.2.3.1, Epi infoTM 3.5.1 (Centers for Disease Control and Prevention) og Microsoft Excel 2016 (Microsoft Corporation). Statistisk analyse vil bli utført ved bruk av STATA/SE 14.0 (STATA Corporation). Deskriptiv analyse vil bli brukt for å tabulere egenskapene til studiepopulasjonen. Kategoriske variabler vil uttrykkes som prosenter, og kontinuerlige variabler som gjennomsnitt ± SD for normalfordelte variabler og median med interkvartilområde for skjeve verdier. Two-tailed Student's t-test, Paired t-test eller enveis variansanalyse (ANOVA) etterfulgt av Bonferronis post-hoc sammenligningstester vil bli brukt for å sammenligne gjennomsnitt, mens Wilcoxon rangsum-test vil bli brukt til å sammenligne medianer. Pearsons kjikvadrattest, Fishers eksakte test eller McNemars kjikvadrattest vil bli brukt til å sammenligne prosenter. Det vil bli utført hensiktsmessige avtaletester. Alle de statistiske analysestadiene vil bli utført av en erfaren statistiker ved å bruke passende metodikk for å sikre riktige og pålitelige resultater.