Cinética de retinol y TBS entre mujeres senegalesas lactantes que viven en un entorno urbano y la relación entre su TBS y las de sus bebés (TBS)

Los objetivos específicos son:

Para determinar la transferencia del trazador a la leche materna Para determinar el coeficiente compuesto (FaS) usando modelos matemáticos Para estimar TBS usando los coeficientes generados y la ecuación RID entre las madres Para estimar TBS del retinol de la leche materna usando la ecuación de balance de masa entre las madres Para estimar TBS de retinol sérico usando la ecuación de balance de masa entre las madres y sus hijos Evaluar la concordancia entre TBS medido por diferentes métodos (la ecuación RID, la ecuación de balance de masa usando retinol derivado de suero o leche materna) entre las madres Evaluar la relación entre las madres y TBS de los niños según su estado Evaluar la ingesta dietética de vitamina A entre las parejas madre-hijo

El estudio está diseñado siguiendo un "modelo de mujer maravilla". Se implementará en la ciudad de Dakar. Se incluirán en el estudio un total de cincuenta y seis (56) parejas de madre e hijo lactantes. Las mujeres se dividirán en 8 grupos de 7 mujeres cada uno. Este tamaño de muestra incluye una tasa de deserción del 15%.

Al inicio del estudio (día 0), se obtendrán muestras de sangre de todas las mujeres después de un ayuno nocturno. También se les pedirá a las mujeres que den muestras de leche ocasionales. Luego, a cada mujer se le administrará una dosis oral de 2,0 μmol de 13C2-acetato de retinilo (Gannon et al., 2014; Kaliwile et al., 2021). Posteriormente, los participantes consumirán un refrigerio a base de mantequilla de maní para proporcionar grasa para mejorar la absorción de la dosis. A las mujeres también se les tomará una muestra de seguimiento el día 14. En cuanto a la línea base, se recolectará una muestra de leche de seguimiento. El muestreo a corto plazo de sangre y leche se realizará entre los días 0 y 14 y entre los días 14 y 109. En total, a cada mujer se le tomarán 4 muestras de sangre y 4 de leche a lo largo del tiempo.

Para los bebés, la prueba RID comenzará el día 14. Después de la sangre de referencia, recibirán 1,0 μmol de 13C2-acetato de retinilo y tendrán una segunda muestra de sangre el día 28. Por lo tanto, los bebés tendrán 2 muestras de sangre.

Se explicará el protocolo a la madre y se obtendrá su consentimiento por escrito. Las parejas lactantes madre-hijo serán desparasitadas antes de iniciar el protocolo de investigación.

Las muestras de sangre se protegerán de la luz con papel de aluminio y se centrifugarán a 3500 rpm durante 15 minutos para separar el suero del coágulo. Todas las centrifugaciones se realizarán en la hora siguiente a la extracción de sangre y utilizando una centrífuga. El suero se dividirá en alícuotas en viales criogénicos estériles y se almacenará a -80 °C en el laboratorio.

En cuanto a las muestras de leche, se prepararán 2 alícuotas en 2 crioviales y se almacenarán a +4°C en campo ya -80°C en laboratorio.

Un cuestionario administrado por el entrevistador permitirá recopilar información de antecedentes y datos dietéticos de parejas madre-hijo. La ingesta dietética de las parejas madre-hijo se evaluará mediante 2 recordatorios dietéticos cuantitativos de 24 horas en días no consecutivos (FAO, 2018). La diversidad dietética mínima para mujeres (MDD-W) también se determinará a partir de los recordatorios dietéticos de 24 horas. Para los niños, los indicadores de prácticas de alimentación de lactantes y niños pequeños se evaluarán siguiendo las últimas recomendaciones de la OMS/UNICEF (OMS/UNICEF, 2021).

Se realizarán mediciones antropométricas para evaluar el estado nutricional de las parejas madre-bebé de acuerdo con los procedimientos estándar.

Análisis de muestra:

La concentración de retinol sérico se realizará mediante HPLC. La abundancia natural de 13C en suero y leche se medirá mediante cromatografía de gases-combustión-espectrometría de masas de relación isotópica (GC-C-IRMS). CRP y AGP serán medidos por el analizador automático Biosystems A15. Los ésteres de retinilo y los carotenoides séricos se realizarán mediante cromatografía líquida de ultra rendimiento (UPLC).

La anemia se evaluará midiendo la hemoglobina (Hb) en sangre completa utilizando un sistema HemoCue (Hb-301) y las pruebas de malaria se realizarán utilizando las pruebas SD BIOLINE Malaria Antigen P.f/Pan1.

Se realizarán análisis adicionales en muestras de saliva en una submuestra de pareja madre-hijo para medir la producción de leche mediante el método de dilución de isótopos de deuterio de dosis materna. El enriquecimiento en deuterio de las muestras de saliva se medirá con un espectrómetro infrarrojo de transformada de Fourier (FTIR Shimadzu IR Affinity, Kioto, Japón).

Modelado de la cinética del retinol entre las madres:

Las concentraciones de retinol en suero y leche materna y los datos de enriquecimiento de isótopos se utilizarán para generar conjuntos de datos de supermujeres. El análisis compartimental basado en modelos se aplicará a los datos de trazadores de isótopos de supermujeres para el enriquecimiento de suero y leche materna utilizando modelos establecidos para el metabolismo de la vitamina A (Green et al., 2020; Gannon et al., 2018) y ampliando estos modelos para incorporar la transferencia de trazadores. a la leche materna.

Determinación de los factores Fa y S:

Los resultados del análisis compartimental basado en modelos incluyen estimaciones de las tasas de transferencia de vitamina A entre compartimentos fisiológicos y los resultados del modelo resultante; masa trazada total, vida media, tasa catabólica fraccionada, tasa de eliminación, tiempo de equilibrio y partición de trazador de suero/cuerpo (factor S). Utilizando supuestos de absorción, se determinará la cantidad de dosis de trazador absorbida y almacenada en el momento del muestreo (relacionada con el factor Fa y otros coeficientes de ecuación relacionados).

Cálculo TBS:

Ecuación de balance de masas: La relación isotópica de trazador a trazado (TTR) (retinol no marcado) en suero se utilizará para estimar las reservas corporales totales de AV (TBS) utilizando la siguiente ecuación con las suposiciones adecuadas:

TBS (μmol)= a × 1/TTR× (factores para la corrección de absorción y almacenamiento) a es la cantidad de dosis Ecuación RID: TBS (μmol)= Fa × S × (1/〖SAp〗) Fa es la fracción de la dosis de trazador oral absorbida y retenida en las tiendas S es la relación entre la actividad específica del retinol (retinol marcado/retinol no marcado) en plasma y la del hígado después de equilibrar la dosis SAp es la actividad específica del retinol (retinol marcado/retinol no marcado) en plasma .

Para las madres, Fa y S se calcularán utilizando modelos matemáticos, mientras que SAp se determinará analíticamente. Entre los niños se utilizarán valores genéricos para Fa y S.

Análisis estadístico:

La entrada de datos y el control de calidad se realizarán utilizando Epi infoTM 7.2.3.1, Epi infoTM 3.5.1 (Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades) y Microsoft Excel 2016 (Microsoft Corporation). El análisis estadístico se realizará utilizando STATA/SE 14.0 (STATA Corporation). El análisis descriptivo se utilizará para tabular las características de la población de estudio. Las variables categóricas se expresarán como porcentajes y las continuas como media ± DE para las variables normalmente distribuidas y mediana con rango intercuartílico para los valores asimétricos. La prueba t de Student de dos colas, la prueba t pareada o el análisis de varianza unidireccional (ANOVA) seguido de las pruebas de comparación post-hoc de Bonferroni se usarán para comparar medias, mientras que la prueba de suma de rangos de Wilcoxon se usará para comparar medianas. Para comparar porcentajes se utilizará la prueba chi-cuadrado de Pearson, la prueba exacta de Fisher o la prueba chi-cuadrado de McNemar. Se realizarán las pruebas de concordancia oportunas. Todas las etapas del análisis estadístico serán realizadas por un estadístico experimentado utilizando la metodología adecuada para garantizar resultados adecuados y fiables.