Kinetika retinolu a TBS u kojících senegalských žen žijících v městském prostředí a vztah mezi jejich TBS a jejich kojenci (TBS)

Specifické cíle jsou:

Stanovit přenos indikátoru do mateřského mléka Stanovit složený koeficient (FaS) pomocí matematického modelování Odhadnout TBS pomocí generovaných koeficientů a rovnice RID mezi matkami Odhadnout TBS z mateřského mléka retinolu pomocí rovnice hmotnostní bilance mezi matkami Odhadnout TBS z sérový retinol pomocí rovnice hmotnostní bilance mezi matkami a jejich dětmi Posoudit shodu mezi TBS měřenou různými metodami (rovnice RID, rovnice hmotnostní bilance využívající retinol získaný ze séra nebo mateřského mléka) mezi matkami Vyhodnotit vztah mezi matkami a TBS dětí podle jejich stavu Posoudit dietní příjem vitaminu A u párů matka-dítě

Studie je navržena podle "Wonder women model". Bude realizován ve městě Dakar. Do studie bude zahrnuto celkem padesát šest (56) kojících párů matka-dítě. Ženy budou rozděleny do 8 skupin po 7 ženách. Tato velikost vzorku zahrnuje míru opotřebení 15 %.

Na začátku (den 0) budou odebrány vzorky krve od všech žen po celonočním hladovění. Ženy budou také požádány, aby poskytly náhodné vzorky mléka. Poté bude každé ženě podána perorální dávka 2,0 μmol 13C2-retinylacetátu (Gannon et al., 2014; Kaliwile et al., 2021). Poté účastníci zkonzumují svačinu na bázi arašídového másla, která poskytne tuk pro zlepšení vstřebávání dávky. Ženám bude také odebrán kontrolní vzorek 14. den. Pokud jde o výchozí stav, bude odebrán kontrolní vzorek mléka. Krátkodobé odběry krve a mléka budou probíhat mezi 0. a 14. dnem a mezi 14. a 109. dnem. Celkem bude každé ženě v průběhu času odebrány 4 vzorky krve a 4 vzorky mléka.

U kojenců začne RID test 14. den. Po základní krvi dostanou 1,0 μmol 13C2-retinylacetátu a druhý vzorek krve jim bude odebrán 28. den. Kojenci tedy budou mít 2 vzorky krve.

Protokol bude matce vysvětlen a bude od ní získán písemný souhlas. Kojící páry matka-dítě budou před zahájením výzkumného protokolu odčerveny.

Vzorky krve budou chráněny před světlem hliníkovou fólií a centrifugovány při 3500 otáčkách za minutu po dobu 15 minut, aby se oddělilo sérum od sraženiny. Všechny centrifugace se provedou hodinu po odběru krve a za použití centrifugy. Sérum bude rozděleno na alikvoty do sterilních kryogenních lahviček a skladováno při -80 °C v laboratoři.

Pokud jde o vzorky mléka, budou připraveny 2 alikvoty ve 2 kryozkumavkách a skladovány při +4°C v terénu a při -80°C v laboratoři.

Dotazník administrovaný tazatelem umožní sběr základních informací a údajů o stravě od párů matka-dítě. Dietní příjem párů matka-dítě bude posuzován pomocí 2 kvantitativních 24hodinových stažení stravy ve dnech, které po sobě nejdou (FAO, 2018). Minimální dietní rozmanitost pro ženy (MDD-W) bude také určena z 24hodinového stažení stravy. U dětí budou ukazatele postupů krmení kojenců a malých dětí hodnoceny podle nejnovějších doporučení WHO/UNICEF (WHO/UNICEF, 2021).

Pro vyhodnocení nutričního stavu párů matka-dítě budou provedena antropometrická měření podle standardních postupů.

Vzorová analýza:

Koncentrace sérového retinolu bude provedena pomocí HPLC. Přirozený výskyt 13C v séru a mléce bude měřen plynovou chromatografií-spalovací-izotopový poměr hmotnostní spektrometrie (GC-C-IRMS). CRP a AGP budou měřeny automatickým analyzátorem Biosystems A15. Retinylové estery a sérové ​​karotenoidy budou vyrobeny ultravýkonnou kapalinovou chromatografií (UPLC).

Anémie bude hodnocena měřením hemoglobinu (Hb) v plné krvi pomocí systému HemoCue (Hb-301) a testování malárie bude provedeno pomocí testů SD BIOLINE Malaria Antigen P.f/Pan1.

Další analýza bude provedena na vzorcích slin v dílčím vzorku páru matka-dítě za účelem měření produkce mléka metodou ředění izotopu deuteria v dávce matka. Obohacení deuteriem ve vzorcích slin bude měřeno infračerveným spektrometrem s Fourierovou transformací (FTIR Shimadzu IR Affinity, Kyoto, Japonsko).

Modelování kinetiky retinolu u matek:

Údaje o koncentracích retinolu v séru a mateřském mléce a obohacení izotopů budou použity k vytvoření datových souborů super žen. Modelová kompartmentová analýza bude aplikována na data izotopového indikátoru super žen pro obohacení séra a mateřského mléka pomocí zavedených modelů metabolismu vitaminu A (Green et al., 2020; Gannon et al., 2018) a rozšíření těchto modelů tak, aby zahrnovaly přenos indikátoru. do mateřského mléka.

Stanovení faktorů Fa a S:

Výstupy z modelové kompartmentové analýzy zahrnují odhady rychlosti přenosu vitaminu A mezi fyziologicky založenými kompartmenty a výsledné výsledky modelu; celková sledovaná hmotnost, poločas rozpadu, frakční katabolická rychlost, rychlost zneškodňování, ekvilibrační doba a rozdělení stopovacího séra/těla (faktor S). S využitím předpokladů absorpce bude určeno množství dávky indikátoru absorbované a uložené v době odběru vzorků (vztaženo na faktor Fa a další související koeficienty rovnic).

Výpočet TBS:

Rovnice hmotnostní bilance: Izotopový poměr traceru k tracee (TTR) (neznačený retinol) v séru bude použit k odhadu celkových zásob VA v těle (TBS) pomocí následující rovnice s příslušnými předpoklady:

TBS (μmol)= a × 1/TTR× (faktory pro korekci absorpce a skladování) a je dávkové množství Rovnice RID: TBS (μmol)= Fa × S × (1/〖SAp〗) Fa je zlomek orální dávka stopovače absorbovaná a zadržená v zásobách S je poměr specifické aktivity retinolu (značený retinol/neznačený retinol) v plazmě k aktivitě v játrech po ekvilibraci dávky SAp je specifická aktivita retinolu (značený retinol/neznačený retinol) v plazmě .

U matek budou Fa a S vypočteny pomocí matematického modelování, zatímco SAp bude stanoven analyticky. U dětí budou použity obecné hodnoty pro Fa a S.

Statistická analýza:

Zadávání dat a kontrola kvality budou prováděny pomocí Epi infoTM 7.2.3.1, Epi infoTM 3.5.1 (Center for Disease Control and Prevention) a Microsoft Excel 2016 (Microsoft Corporation). Statistická analýza bude provedena pomocí STATA/SE 14.0 (STATA Corporation). Deskriptivní analýza bude použita k tabelování charakteristik studované populace. Kategoriální proměnné budou vyjádřeny jako procenta a spojité proměnné jako průměr ± SD pro normálně rozdělené proměnné a medián s mezikvartilovým rozsahem pro zkreslené hodnoty. K porovnání průměrů bude použit dvoustranný Studentův t-test, Párový t-test nebo jednosměrná analýza rozptylu (ANOVA) následovaná Bonferroniho post-hoc srovnávacími testy, zatímco k porovnání mediánů bude použit Wilcoxonův rank-sum test. Pro srovnání procent bude použit Pearsonův chí-kvadrát test, Fisherův exaktní test nebo McNemarův chí-kvadrát test. Budou provedeny příslušné testy dohody. Všechny fáze statistické analýzy provede zkušený statistik za použití vhodné metodologie, aby byly zajištěny správné a spolehlivé výsledky.