Kinetyka retinolu i TBS wśród karmiących Senegalek żyjących w środowisku miejskim oraz związek między ich TBS a TBS ich niemowląt (TBS)

Cele szczegółowe to:

Określenie przenikania znacznika do mleka matki Określenie współczynnika złożonego (FaS) za pomocą modelowania matematycznego Oszacowanie TBS przy użyciu wygenerowanych współczynników i równania RID wśród matek Oszacowanie TBS z retinolu w mleku matki przy użyciu równania bilansu masy u matek Oszacowanie TBS z retinolu w surowicy przy użyciu równania bilansu masy u matek i ich dzieci Ocena zgodności TBS mierzonej różnymi metodami (równanie RID, równanie bilansu masy przy użyciu retinolu pochodzącego z surowicy lub mleka kobiecego) u matek Ocena zależności między TBS dzieci w zależności od ich statusu Ocena spożycia witaminy A w diecie par matka-dziecko

Badanie zostało zaprojektowane zgodnie z „modelem cudownych kobiet”. Zostanie wdrożony w mieście Dakar. Badaniem zostanie objętych łącznie pięćdziesiąt sześć (56) par matka-dziecko w okresie laktacji. Kobiety zostaną podzielone na 8 grup po 7 kobiet w każdej. Ta wielkość próby obejmuje współczynnik ścierania wynoszący 15%.

Na linii podstawowej (dzień 0) próbki krwi będą pobierane od wszystkich kobiet po całonocnym poście. Kobiety zostaną również poproszone o oddawanie przypadkowych próbek mleka. Następnie każda kobieta otrzyma doustnie dawkę 2,0 μmol octanu 13C2-retinylu (Gannon i in., 2014; Kaliwile i in., 2021). Następnie uczestnicy zjedzą przekąskę na bazie masła orzechowego, aby dostarczyć tłuszczu, aby poprawić wchłanianie dawki. Kobiety otrzymają również próbkę kontrolną pobraną w dniu 14. Jeśli chodzi o poziom wyjściowy, zostanie pobrana kolejna próbka mleka. Krótkoterminowe pobieranie próbek zarówno krwi, jak i mleka będzie miało miejsce między dniami 0 a 14 oraz między dniami 14 a 109. W sumie od każdej kobiety zostaną pobrane 4 próbki krwi i 4 próbki mleka.

W przypadku niemowląt test RID rozpocznie się w dniu 14. Po podstawowej krwi otrzymają 1,0 μmol octanu 13C2-retinylu i otrzymają drugą próbkę krwi w dniu 28. Tak więc niemowlęta będą miały 2 próbki krwi.

Protokół zostanie wyjaśniony matce i uzyskana zostanie od niej pisemna zgoda. Pary matka-niemowlę w okresie laktacji zostaną odrobaczone przed rozpoczęciem protokołu badawczego.

Próbki krwi będą chronione przed światłem folią aluminiową i wirowane przy 3500 obr./min przez 15 minut w celu oddzielenia surowicy od skrzepu. Wszystkie wirowania będą wykonywane w ciągu godziny po pobraniu krwi i przy użyciu wirówki. Surowica zostanie podzielona na porcje do sterylnych fiolek kriogenicznych i będzie przechowywana w laboratorium w temperaturze -80 °C.

Jeśli chodzi o próbki mleka, 2 porcje zostaną przygotowane w 2 kriofiolkach i będą przechowywane w temperaturze +4°C w terenie iw temperaturze -80°C w laboratorium.

Kwestionariusz prowadzony przez ankietera umożliwi zebranie podstawowych informacji i danych dotyczących diety od par matka-niemowlę. Spożycie dietetyczne par matka-niemowlę zostanie ocenione za pomocą 2 ilościowych 24-godzinnych przypomnień żywieniowych w dniach nie następujących po sobie (FAO, 2018). Minimalna różnorodność żywieniowa dla kobiet (MDD-W) zostanie również określona na podstawie 24-godzinnych wycofań dietetycznych. W przypadku dzieci, wskaźniki praktyk żywieniowych niemowląt i małych dzieci zostaną ocenione zgodnie z najnowszymi zaleceniami WHO/UNICEF (WHO/UNICEF, 2021).

Zostaną wykonane pomiary antropometryczne w celu oceny stanu odżywienia par matka-niemowlę zgodnie ze standardowymi procedurami.

Przykładowa analiza:

Stężenie retinolu w surowicy zostanie określone metodą HPLC. Naturalna obfitość 13C w surowicy i mleku będzie mierzona za pomocą chromatografii gazowej ze spektrometrią masową ze stosunkiem izotopów (GC-C-IRMS). CRP i AGP będą mierzone automatycznym analizatorem Biosystems A15. Estry retinylu i karotenoidy w surowicy zostaną wykonane za pomocą ultrasprawnej chromatografii cieczowej (UPLC).

Niedokrwistość zostanie oceniona poprzez pomiar hemoglobiny (Hb) w pełnej krwi za pomocą systemu HemoCue (Hb-301), a badanie na obecność malarii zostanie przeprowadzone przy użyciu testów SD BIOLINE Malaria Antigen P.f/Pan1.

Dalsza analiza zostanie przeprowadzona na próbkach śliny w podpróbce pary matka-dziecko w celu zmierzenia produkcji mleka metodą rozcieńczania izotopu deuteru w dawce matki. Wzbogacenie próbek śliny deuterem będzie mierzone za pomocą spektrometru w podczerwieni z transformacją Fouriera (FTIR Shimadzu IR Affinity, Kyoto, Japonia).

Modelowanie kinetyki retinolu wśród matek:

Stężenia retinolu w surowicy i mleku matki oraz dane dotyczące wzbogacenia izotopowego zostaną wykorzystane do wygenerowania zestawów danych superkobiet. Oparta na modelu analiza przedziałowa zostanie zastosowana do danych znacznika izotopowego superkobiet w celu wzbogacenia surowicy i mleka matki przy użyciu ustalonych modeli metabolizmu witaminy A (Green i in., 2020; Gannon i in., 2018) oraz rozszerzenia tych modeli o transfer znacznika do mleka matki.

Oznaczanie współczynników Fa i S:

Dane wyjściowe z analizy przedziałowej opartej na modelu obejmują szacunki dotyczące szybkości transferu witaminy A między przedziałami opartymi na fizjologii i wynikające z nich wyniki modelu; całkowita masa śladowa, okres półtrwania, ułamkowa szybkość kataboliczna, szybkość usuwania, czas równoważenia i podział surowica/wskaźnik ciała (czynnik S). Wykorzystując założenia dotyczące absorpcji, zostanie określona ilość dawki znacznika pochłoniętej i zmagazynowanej w czasie pobierania próbek (w odniesieniu do współczynnika Fa i innych powiązanych współczynników równania).

Kalkulacja TBS:

Równanie bilansu masy: Stosunek izotopowy znacznika do śladu (TTR) (nieznakowany retinol) w surowicy zostanie wykorzystany do oszacowania całkowitych zapasów VA w organizmie (TBS) przy użyciu następującego równania z odpowiednimi założeniami:

TBS (μmol)= a × 1/TTR× (współczynniki korygujące absorpcję i magazynowanie) a to wielkość dawki Równanie RID: TBS (μmol)= Fa × S × (1/〖SAp〗) Fa to ułamek doustna dawka znacznika wchłonięta i zatrzymana w zapasach S to stosunek aktywności właściwej retinolu (retinol znakowany/retinol nieznakowany) w osoczu do aktywności w wątrobie po wyrównaniu dawki SAp to aktywność właściwa retinolu (retinol znakowany/retinol nieznakowany) w osoczu .

W przypadku matek Fa i S zostaną obliczone za pomocą modelowania matematycznego, podczas gdy SAP zostanie określony analitycznie. Wśród dzieci zostaną użyte ogólne wartości Fa i S.

Analiza statystyczna:

Wprowadzanie danych i kontrola jakości będą wykonywane przy użyciu Epi infoTM 7.2.3.1, Epi infoTM 3.5.1 (Centra Kontroli i Prewencji Chorób) oraz Microsoft Excel 2016 (Microsoft Corporation). Analiza statystyczna zostanie przeprowadzona przy użyciu STATA/SE 14.0 (STATA Corporation). Analiza opisowa zostanie wykorzystana do zestawienia cech badanej populacji. Zmienne kategorialne zostaną wyrażone w procentach, a zmienne ciągłe jako średnia ± SD dla zmiennych o rozkładzie normalnym i mediana z przedziałem międzykwartylowym dla wartości skośnych. Dwustronny test t-Studenta, test t dla par lub jednokierunkowa analiza wariancji (ANOVA), a następnie testy porównawcze post-hoc Bonferroniego zostaną użyte do porównania średnich, podczas gdy test sumy rang Wilcoxona zostanie użyty do porównania median. Do porównania wartości procentowych zostanie wykorzystany test chi-kwadrat Pearsona, dokładny test Fishera lub test chi-kwadrat McNemara. Zostaną przeprowadzone odpowiednie testy zgodności. Wszystkie etapy analizy statystycznej zostaną przeprowadzone przez doświadczonego statystyka przy użyciu odpowiedniej metodologii, aby zapewnić prawidłowe i wiarygodne wyniki.