Cinetica del retinolo e TBS tra le donne senegalesi che allattano che vivono in un contesto urbano e la relazione tra la loro TBS e quella dei loro bambini (TBS)

Gli obiettivi specifici sono:

Per determinare il trasferimento del tracciante nel latte materno Per determinare il coefficiente composito (FaS) utilizzando modelli matematici Per stimare il TBS utilizzando i coefficienti generati e l'equazione RID tra le madri Per stimare il TBS dal retinolo del latte materno utilizzando l'equazione del bilancio di massa tra le madri Per stimare il TBS da retinolo sierico utilizzando l'equazione del bilancio di massa tra le madri e i loro figli Per valutare l'accordo tra TBS misurato con metodi diversi (l'equazione RID, l'equazione del bilancio di massa che utilizza il retinolo derivato dal siero o dal latte materno) tra le madri Per valutare la relazione tra il retinolo materno e TBS dei bambini in base al loro stato Valutare l'assunzione dietetica di vitamina A nelle coppie madre-bambino

Lo studio è progettato seguendo un "modello Wonder women". Sarà implementato nella città di Dakar. Nello studio saranno incluse in totale cinquantasei (56) coppie madre-bambino che allattano. Le donne saranno divise in 8 gruppi di 7 donne ciascuno. Questa dimensione del campione include un tasso di abbandono del 15%.

Al basale (giorno 0), verranno prelevati campioni di sangue da tutte le donne dopo un digiuno notturno. Alle donne verrà anche chiesto di fornire campioni casuali di latte. Quindi, a ciascuna donna verrà somministrata una dose orale di 2,0 μmol 13C2 -retinil acetato (Gannon et al., 2014; Kaliwile et al., 2021). Successivamente, i partecipanti consumeranno uno spuntino a base di burro di arachidi per fornire grassi per migliorare l'assorbimento della dose. Le donne avranno anche un campione di follow-up prelevato al giorno 14. Per quanto riguarda il basale, verrà raccolto un campione di latte di follow-up. Il campionamento a breve termine di sangue e latte avverrà tra i giorni 0 e 14 e tra i giorni 14 e 109. In totale, ogni donna avrà 4 campioni di sangue e 4 campioni di latte prelevati nel tempo.

Per i neonati, il test RID inizierà il giorno 14. Dopo il sangue di riferimento, riceveranno 1,0 μmol di 13C2-retinil acetato e avranno un secondo campione di sangue al giorno 28. Pertanto, i neonati avranno 2 campioni di sangue.

Il protocollo verrà spiegato alla madre e da lei verrà ottenuto il consenso scritto. Le coppie madre-bambino in allattamento saranno sverminate prima di iniziare il protocollo di ricerca.

I campioni di sangue saranno protetti dalla luce con un foglio di alluminio e centrifugati a 3500 rpm per 15 minuti per separare il siero dal coagulo. Tutte le centrifugazioni verranno effettuate nell'ora successiva al prelievo di sangue e utilizzando una centrifuga. Il siero sarà aliquotato in fiale criogeniche sterili e conservato a -80 °C presso il laboratorio.

Per quanto riguarda i campioni di latte, 2 aliquote saranno preparate in 2 criovial e conservate a +4°C in campo ea -80°C in laboratorio.

Un questionario somministrato dall'intervistatore consentirà la raccolta di informazioni di base e dati dietetici da coppie madre-bambino. L'assunzione dietetica delle coppie madre-bambino sarà valutata utilizzando 2 richiami dietetici quantitativi di 24 ore in giorni non consecutivi (FAO, 2018). La diversità dietetica minima per le donne (MDD-W) sarà determinata anche dai richiami dietetici di 24 ore. Per i bambini, gli indicatori delle pratiche di alimentazione dei lattanti e dei bambini piccoli saranno valutati seguendo le ultime raccomandazioni dell'OMS/UNICEF (OMS/UNICEF, 2021).

Verranno eseguite misurazioni antropometriche per valutare lo stato nutrizionale delle coppie madre-bambino secondo procedure standard.

Analisi del campione:

La concentrazione del retinolo sierico sarà effettuata mediante HPLC. L'abbondanza naturale di 13C nel siero e nel latte sarà misurata mediante gascromatografia-combustione-spettrometria di massa del rapporto isotopico (GC-C-IRMS). CRP e AGP saranno misurati dall'analizzatore automatico Biosystems A15. Esteri di retinile e carotenoidi sierici saranno analizzati mediante cromatografia liquida ad alte prestazioni (UPLC).

L'anemia sarà valutata misurando l'emoglobina (Hb) nel sangue intero utilizzando un sistema HemoCue (Hb-301) e il test della malaria sarà eseguito utilizzando i test SD BIOLINE Malaria Antigen P.f/Pan1.

Ulteriori analisi saranno effettuate su campioni di saliva in un sottocampione di coppia madre-bambino per misurare la produzione di latte mediante il metodo della diluizione isotopica del deuterio a dose madre. L'arricchimento in deuterio dei campioni di saliva sarà misurato con uno spettrometro infrarosso in trasformata di Fourier (FTIR Shimadzu IR Affinity, Kyoto, Giappone).

Modellazione della cinetica del retinolo tra le madri:

Le concentrazioni di retinolo nel siero e nel latte materno e i dati sull'arricchimento degli isotopi verranno utilizzati per generare set di dati di superdonne. L'analisi compartimentale basata su modello sarà applicata ai dati del tracciante isotopico delle super donne per l'arricchimento del siero e del latte materno utilizzando modelli consolidati per il metabolismo della vitamina A (Green et al., 2020; Gannon et al., 2018) ed espandendo questi modelli per incorporare il trasferimento del tracciante al latte materno.

Determinazione dei fattori Fa e S:

I risultati dell'analisi compartimentale basata su modello includono le stime per i tassi di trasferimento della vitamina A tra i compartimenti basati sulla fisiologia e i risultanti risultati del modello; massa tracciata totale, emivita, velocità catabolica frazionaria, velocità di smaltimento, tempo di equilibrio e partizione siero/tracciante corporeo (fattore S). Usando ipotesi di assorbimento, sarà determinata la quantità di dose di tracciante assorbita e immagazzinata al momento del campionamento (correlata al fattore Fa e ad altri coefficienti di equazione correlati).

Calcolo TBS:

Equazione del bilancio di massa: il rapporto isotopico tra tracciante e tracee (TTR) (retinolo non marcato) nel siero verrà utilizzato per stimare le riserve totali di VA corporee (TBS) utilizzando la seguente equazione con ipotesi appropriate:

TBS (μmol)= a × 1/TTR× (fattori per la correzione dell'assorbimento e della conservazione) a è la quantità di dose Equazione RID: TBS (μmol)= Fa × S × (1/〖SAp〗) Fa è la frazione del dose di tracciante orale assorbita e trattenuta nelle riserve S è il rapporto tra l'attività specifica del retinolo (retinolo marcato/retinolo non marcato) nel plasma e quella nel fegato dopo l'equilibratura della dose SAp è l'attività specifica del retinolo (retinolo marcato/retinolo non marcato) nel plasma .

Per le madri, Fa e S saranno calcolate utilizzando modelli matematici mentre SAp sarà determinato analiticamente. Tra i bambini verranno utilizzati valori generici per Fa e S.

Analisi statistica:

L'inserimento dei dati e il controllo di qualità saranno eseguiti utilizzando Epi infoTM 7.2.3.1, Epi infoTM 3.5.1 (Centers for Disease Control and Prevention) e Microsoft Excel 2016 (Microsoft Corporation). L'analisi statistica sarà eseguita utilizzando STATA/SE 14.0 (STATA Corporation). L'analisi descrittiva sarà utilizzata per tabulare le caratteristiche della popolazione in studio. Le variabili categoriche saranno espresse come percentuali e le variabili continue come media ± DS per variabili distribuite normalmente e mediana con intervallo interquartile per valori asimmetrici. Il test t di Student a due code, il test t accoppiato o l'analisi della varianza unidirezionale (ANOVA) seguiti dai test di confronto post-hoc di Bonferroni verranno utilizzati per confrontare le medie mentre il test della somma dei ranghi di Wilcoxon verrà utilizzato per confrontare le mediane. Il test del chi quadrato di Pearson, il test esatto di Fisher o il test del chi quadrato di McNemar verranno utilizzati per confrontare le percentuali. Saranno eseguiti test di accordo appropriati. Tutte le fasi dell'analisi statistica saranno eseguite da uno statistico esperto utilizzando una metodologia appropriata per garantire risultati corretti e affidabili.