Kinetiek van retinol en tbs bij zogende Senegalese vrouwen die in een stedelijke omgeving leven en de relatie tussen hun tbs en die van hun baby's (TBS)

Specifieke doelstellingen zijn:

Om overdracht van tracer naar moedermelk te bepalen Om de samengestelde coëfficiënt (FaS) te bepalen met behulp van wiskundige modellering Om TBS te schatten met behulp van de gegenereerde coëfficiënten en de RID-vergelijking bij moeders Om TBS te schatten van moedermelk retinol met behulp van de massabalansvergelijking bij moeders TBS te schatten van serumretinol met behulp van de massabalansvergelijking tussen moeders en hun kinderen Om de overeenkomst tussen TBS gemeten met verschillende methoden (de RID-vergelijking, de massabalansvergelijking met serum of van moedermelk afgeleide retinol) bij moeders te beoordelen Om de relatie tussen moeders en TBS bij kinderen volgens hun status Om de inname van vitamine A via de voeding bij moeder-kind-paren te beoordelen

De studie is ontworpen volgens een "Wonder Women-model". Het zal worden geïmplementeerd in de stad Dakar. In totaal zullen zesenvijftig (56) zogende moeder-kindparen in het onderzoek worden opgenomen. De vrouwen worden verdeeld in 8 groepen van elk 7 vrouwen. Deze steekproefomvang omvat een verlooppercentage van 15%.

Bij baseline (dag 0) zullen bloedmonsters worden verkregen van alle vrouwen na een nacht vasten. Vrouwen zullen ook worden gevraagd om toevallige melkmonsters te geven. Vervolgens krijgt elke vrouw een orale dosis van 2,0 μmol 13C2-retinylacetaat (Gannon et al., 2014; Kaliwile et al., 2021). Daarna consumeren de deelnemers een snack op basis van pindakaas om vet te leveren om de dosisabsorptie te verbeteren. Op dag 14 krijgen de vrouwen ook een vervolgmonster. Wat betreft de basislijn, zal een vervolgmelkmonster worden verzameld. Kortdurende bemonstering van zowel bloed als melk vindt plaats tussen dag 0 en 14 en tussen dag 14 en 109. In totaal zal elke vrouw in de loop van de tijd 4 bloed- en 4 melkmonsters laten nemen.

Voor baby's begint de RID-test op dag 14. Na het basislijnbloed krijgen ze 1,0 μmol 13C2-retinylacetaat en krijgen ze een tweede bloedmonster op dag 28. Baby's krijgen dus 2 bloedmonsters.

Het protocol wordt aan de moeder uitgelegd en er wordt schriftelijke toestemming van haar verkregen. Zogende moeder-kind-paren worden ontwormd voordat het onderzoeksprotocol wordt gestart.

De bloedmonsters worden met aluminiumfolie tegen licht beschermd en gedurende 15 minuten bij 3500 rpm gecentrifugeerd om serum van stolsel te scheiden. Alle centrifugaties worden gedaan in het uur na de bloedafname en met behulp van een centrifuge. Het serum wordt verdeeld in steriele cryogene flesjes en bewaard bij -80 °C in het laboratorium.

Wat de melkmonsters betreft, worden 2 aliquots bereid in 2 cryoflesjes en bewaard bij +4°C in het veld en bij -80°C in het laboratorium.

Een door een interviewer afgenomen vragenlijst maakt het verzamelen van achtergrondinformatie en voedingsgegevens van moeder-kind-paren mogelijk. De voedingsinname van moeder-kind-paren zal worden beoordeeld met behulp van 2 kwantitatieve 24-uurs voedingsherinneringen op niet-opeenvolgende dagen (FAO, 2018). De minimale voedingsdiversiteit voor vrouwen (MDD-W) wordt ook bepaald op basis van de 24-uurs voedingsherinneringen. Voor kinderen zullen indicatoren voor voedingspraktijken voor zuigelingen en jonge kinderen worden beoordeeld volgens de laatste aanbevelingen van de WHO/UNICEF (WHO/UNICEF, 2021).

Antropometrische metingen zullen worden uitgevoerd om de voedingsstatus van moeder-kindparen te evalueren volgens standaardprocedures.

Voorbeeldanalyse:

Serum Retinol-concentratie zal worden gedaan door HPLC. De natuurlijke hoeveelheid 13C in serum en melk zal worden gemeten door middel van gaschromatografie-verbranding-isotopenverhouding massaspectrometrie (GC-C-IRMS). CRP en AGP worden gemeten door Biosystems A15 automatische analysator. Retinylesters en serumcarotenoïden worden gedaan door middel van Ultra-Performance Liquid Chromatography (UPLC).

Bloedarmoede zal worden beoordeeld door hemoglobine (Hb) in volbloed te meten met behulp van een HemoCue-systeem (Hb-301) en malariatests zullen worden uitgevoerd met behulp van SD BIOLINE Malaria Antigen P.f/Pan1-testen.

Verdere analyse zal worden uitgevoerd op speekselmonsters in een submonster van een moeder-kindpaar om de melkproductie te meten met de moederdosis deuterium-isotopenverdunningsmethode. Deuteriumverrijking van speekselmonsters zal worden gemeten met een Fourier-transformatie-infraroodspectrometer (FTIR Shimadzu IR Affinity, Kyoto, Japan).

Retinolkinetiek modelleren bij moeders:

Serum- en moedermelkretinolconcentraties en isotopenverrijkingsgegevens zullen worden gebruikt om datasets voor supervrouwen te genereren. Op modellen gebaseerde compartimentanalyse zal worden toegepast op isotoop-tracergegevens van supervrouwen voor serum- en moedermelkverrijking met behulp van gevestigde modellen voor vitamine A-metabolisme (Green et al., 2020; Gannon et al., 2018) en deze modellen uitbreiden om traceroverdracht op te nemen aan moedermelk.

Bepaling van Fa- en S-factoren:

Uitvoer van de op modellen gebaseerde compartimentanalyse omvat schattingen voor vitamine A-overdrachtssnelheden tussen fysiologisch gebaseerde compartimenten en de resulterende modeluitkomsten; totale getraceerde massa, halfwaardetijd, fractionele katabolische snelheid, verwijderingssnelheid, equilibratietijd en verdeling serum/lichaam tracer (factor S). Met behulp van absorptieaannames zal de hoeveelheid tracerdosis die wordt geabsorbeerd en opgeslagen op het moment van bemonstering (gerelateerd aan factor Fa en andere gerelateerde vergelijkingscoëfficiënten) worden bepaald.

TBS berekening:

Massabalansvergelijking: De isotopenverhouding van tracer tot tracee (TTR) (niet-gelabeld retinol) in serum zal worden gebruikt om de totale lichaams-VA-voorraden (TBS) te schatten met behulp van de volgende vergelijking met de juiste aannames:

TBS (μmol)= a × 1/TTR× (factoren voor correctie van absorptie en opslag) a is de dosishoeveelheid RID-vergelijking: TBS (μmol)= Fa × S × (1/〖SAp〗) Fa is de fractie van de orale tracerdosis geabsorbeerd en bewaard in winkels S is de verhouding van de specifieke activiteit van retinol (gelabeld retinol/niet-gelabeld retinol) in plasma tot die in de lever na dosis-equilibratie SAP is de specifieke activiteit van retinol (gelabeld retinol/niet-gelabeld retinol) in plasma .

Voor moeders worden Fa en S berekend met behulp van wiskundige modellen, terwijl SAP analytisch wordt bepaald. Bij kinderen zullen generieke waarden voor Fa en S worden gebruikt.

Statistische analyse:

Gegevensinvoer en kwaliteitscontrole worden uitgevoerd met behulp van Epi infoTM 7.2.3.1, Epi infoTM 3.5.1 (Centers voor ziektebestrijding en -preventie) en Microsoft Excel 2016 (Microsoft Corporation). Statistische analyse zal worden uitgevoerd met behulp van STATA/SE 14.0 (STATA Corporation). Beschrijvende analyse zal worden gebruikt om de kenmerken van de onderzoekspopulatie in tabelvorm weer te geven. Categorische variabelen worden uitgedrukt als percentages en continue variabelen als gemiddelde ± SD voor normaal verdeelde variabelen en mediaan met interkwartielbereik voor scheve waarden. Tweezijdige Student's t-toets, Gepaarde t-toets of one-way variantieanalyse (ANOVA) gevolgd door Bonferroni's post-hoc vergelijkingstoetsen zullen worden gebruikt om gemiddelden te vergelijken, terwijl de Wilcoxon rangsomtoets zal worden gebruikt om medianen te vergelijken. De chikwadraattoets van Pearson, de exacttoets van Fisher of de chikwadraattoets van McNemar worden gebruikt om percentages te vergelijken. Er zullen passende overeenstemmingstests worden uitgevoerd. Alle stadia van de statistische analyse zullen worden uitgevoerd door een ervaren statisticus die de juiste methodologie gebruikt om correcte en betrouwbare resultaten te garanderen.