Кинетика ретинола и TBS среди кормящих сенегальских женщин, живущих в городских условиях, и взаимосвязь между их TBS и их младенцами (TBS)

Конкретные цели:

Определить переход трассера в грудное молоко Определить составной коэффициент (FaS) с помощью математического моделирования Оценить TBS с помощью сгенерированных коэффициентов и уравнения RID среди матерей Оценить TBS из ретинола грудного молока с помощью уравнения баланса массы среди матерей сывороточный ретинол с использованием уравнения баланса массы среди матерей и их детей. Оценить соответствие между TBS, измеренным различными методами (уравнение RID, уравнение баланса массы с использованием ретинола, полученного из сыворотки или грудного молока) среди матерей. TBS у детей в зависимости от их статуса. Оценить потребление витамина А с пищей среди пар мать-ребенок.

Исследование разработано в соответствии с «моделью чудо-женщин». Он будет реализован в городе Дакар. Всего в исследование будет включено пятьдесят шесть (56) кормящих пар мать-ребенок. Женщины будут разделены на 8 групп по 7 женщин в каждой. Этот размер выборки включает коэффициент отсева 15%.

На исходном уровне (день 0) образцы крови будут получены у всех женщин после ночного голодания. Женщин также попросят сдать случайные пробы молока. Затем каждой женщине будет назначена пероральная доза 2,0 мкмоль 13C2-ретинилацетата (Gannon et al., 2014; Kaliwile et al., 2021). После этого участники будут потреблять закуску на основе арахисового масла, чтобы обеспечить жир для улучшения усвоения дозы. У женщин также будет взята последующая проба на 14-й день. Что касается исходного уровня, будет взята последующая проба молока. Кратковременный забор крови и молока будет проводиться между 0 и 14 днями и между 14 и 109 днями. Всего у каждой женщины будет взято 4 пробы крови и 4 пробы молока.

Для младенцев тест RID начинается на 14-й день. После исходного уровня крови они получат 1,0 мкмоль 13C2-ретинилацетата и получат второй образец крови на 28-й день. Таким образом, у младенцев будет 2 образца крови.

Протокол будет объяснен матери, и от нее будет получено письменное согласие. Кормящие пары мать-младенец будут дегельминтизированы перед началом протокола исследования.

Образцы крови будут защищены от света алюминиевой фольгой и центрифугированы при 3500 об/мин в течение 15 минут для отделения сыворотки от сгустка. Все центрифугирования будут проводиться в течение часа после забора крови с использованием центрифуги. Аликвоты сыворотки разливают в стерильные криогенные флаконы и хранят в лаборатории при температуре -80 °C.

Что касается образцов молока, то будут приготовлены 2 аликвоты в 2 криопробирках и будут храниться при +4°C в полевых условиях и при -80°C в лаборатории.

Анкета, заполняемая интервьюером, позволит собрать справочную информацию и данные о питании пар мать-младенец. Потребление пищи парами мать-младенец будет оцениваться с использованием двух количественных 24-часовых отзывов о питании в непоследовательные дни (FAO, 2018). Минимальное разнообразие рациона питания для женщин (MDD-W) также будет определяться на основе 24-часовых отзывов о питании. Для детей показатели практики кормления детей грудного и раннего возраста будут оцениваться в соответствии с последними рекомендациями ВОЗ/ЮНИСЕФ (ВОЗ/ЮНИСЕФ, 2021 г.).

Антропометрические измерения будут проводиться для оценки статуса питания пар мать-младенец в соответствии со стандартными процедурами.

Образец анализа:

Концентрацию ретинола в сыворотке определяют с помощью ВЭЖХ. Естественное содержание 13C в сыворотке и молоке будет измеряться с помощью масс-спектрометрии газовой хроматографии-сгорания-соотношения изотопов (GC-C-IRMS). CRP и AGP будут измеряться автоматическим анализатором Biosystems A15. Ретиниловые эфиры и каротиноиды сыворотки будут определены с помощью сверхэффективной жидкостной хроматографии (UPLC).

Анемия будет оцениваться путем измерения гемоглобина (Hb) в цельной крови с использованием системы HemoCue (Hb-301), а тестирование на малярию будет проводиться с использованием тестов SD BIOLINE Malaria Antigen P.f/Pan1.

Дальнейший анализ будет проведен на образцах слюны в подвыборке пары мать-ребенок для измерения выработки молока методом разбавления дозы изотопов дейтерия в материнской дозе. Обогащение образцов слюны дейтерием будет измеряться с помощью инфракрасного спектрометра с преобразованием Фурье (FTIR Shimadzu IR Affinity, Киото, Япония).

Моделирование кинетики ретинола среди матерей:

Концентрации ретинола в сыворотке и грудном молоке и данные по обогащению изотопами будут использоваться для создания наборов данных о суперженщинах. Компартментальный анализ на основе моделей будет применяться к данным изотопных индикаторов суперженщин для обогащения сыворотки и грудного молока с использованием установленных моделей метаболизма витамина А (Green et al., 2020; Gannon et al., 2018) и расширения этих моделей для включения переноса индикатора. к грудному молоку.

Определение факторов Fa и S:

Результаты компартментального анализа на основе модели включают оценки скорости переноса витамина А между физиологически обоснованными компартментами и результирующие результаты модели; общая прослеженная масса, период полувыведения, фракционная скорость катаболизма, скорость выведения, время уравновешивания и распределение индикаторов сыворотки/тела (фактор S). Используя допущения об абсорбции, будет определено количество поглощенной и сохраненной дозы индикатора во время отбора проб (относительно фактора Fa и других соответствующих коэффициентов уравнения).

Расчет ТБС:

Уравнение баланса массы: соотношение изотопов трассера к трассе (TTR) (немеченый ретинол) в сыворотке будет использоваться для оценки общих запасов VA в организме (TBS) с использованием следующего уравнения с соответствующими допущениями:

TBS (мкмоль) = a × 1/TTR × (коэффициенты для коррекции абсорбции и накопления) a — количество дозы Уравнение RID: TBS (мкмоль) = Fa × S × (1/〖SAp〗) Fa — доля доза перорального индикатора, абсорбированная и удерживаемая в запасах S — отношение удельной активности ретинола (меченый ретинол/немеченый ретинол) в плазме к таковой в печени после уравновешивания дозы SAp — удельная активность ретинола (меченый ретинол/немеченый ретинол) в плазме .

Для матерей Fa и S будут рассчитываться с использованием математического моделирования, а SAP будет определяться аналитически. Среди детей будут использоваться общие значения Fa и S.

Статистический анализ:

Ввод данных и контроль качества будут выполняться с использованием Epi infoTM 7.2.3.1, Epi infoTM 3.5.1 (Центры по контролю и профилактике заболеваний) и Microsoft Excel 2016 (Microsoft Corporation). Статистический анализ будет выполнен с использованием STATA/SE 14.0 (STATA Corporation). Описательный анализ будет использоваться для составления таблиц характеристик изучаемой популяции. Категориальные переменные будут выражены в процентах, а непрерывные переменные - как среднее ± стандартное отклонение для нормально распределенных переменных и медиана с межквартильным диапазоном для искаженных значений. Двусторонний t-критерий Стьюдента, парный t-критерий или однофакторный дисперсионный анализ (ANOVA) с последующими апостериорными сравнительными тестами Бонферрони будут использоваться для сравнения средних значений, а критерий суммы рангов Уилкоксона будет использоваться для сравнения медиан. Для сравнения процентов будут использоваться критерий хи-квадрат Пирсона, точный критерий Фишера или критерий хи-квадрат Макнемара. Будут проведены соответствующие тесты согласования. Все этапы статистического анализа будут выполняться опытным статистиком с использованием соответствующей методологии для обеспечения правильных и надежных результатов.