Cinética de retinol e TBS entre mulheres senegalesas lactantes que vivem em um ambiente urbano e a relação entre seu TBS e o de seus bebês (TBS)

Os objetivos específicos são:

Determinar a transferência do traçador para o leite materno Determinar o coeficiente composto (FaS) usando modelagem matemática Estimar TBS usando os coeficientes gerados e a equação RID entre mães Estimar TBS a partir do retinol do leite materno usando a equação de balanço de massa entre mães Estimar TBS a partir de retinol sérico usando a equação de balanço de massa entre mães e seus filhos Avaliar a concordância entre TBS medido por diferentes métodos (a equação RID, a equação de balanço de massa usando soro ou retinol derivado do leite materno) entre mães Avaliar a relação entre mães e TBS infantil de acordo com seu estado Avaliar a ingestão dietética de vitamina A entre pares mãe-filho

O estudo foi concebido seguindo um "modelo de mulheres maravilha". Será implementado na cidade de Dakar. Um total de cinquenta e seis (56) pares mãe-filho lactantes serão incluídos no estudo. As mulheres serão divididas em 8 grupos de 7 mulheres cada. Este tamanho de amostra inclui uma taxa de atrito de 15%.

Na linha de base (dia 0), amostras de sangue serão obtidas de todas as mulheres após jejum noturno. As mulheres também serão solicitadas a fornecer amostras casuais de leite. Em seguida, cada mulher receberá uma dose oral de 2,0 μmol de 13C2 -acetato de retinol (Gannon et al., 2014; Kaliwile et al., 2021). Posteriormente, os participantes consumirão um lanche à base de manteiga de amendoim para fornecer gordura para melhorar a absorção da dose. As mulheres também terão uma amostra de acompanhamento coletada no dia 14. Quanto à linha de base, uma amostra de leite de acompanhamento será coletada. A amostragem de curto prazo de sangue e leite ocorrerá entre os dias 0 e 14 e entre os dias 14 e 109. No total, cada mulher terá 4 amostras de sangue e 4 de leite coletadas ao longo do tempo.

Para bebês, o teste RID começará no dia 14. Após o sangue basal, eles receberão 1,0 μmol de acetato de 13C2-retinil e terão uma segunda amostra de sangue no dia 28. Assim, os bebês terão 2 amostras de sangue.

O protocolo será explicado à mãe e o consentimento por escrito será obtido dela. Os pares mãe-bebê lactantes serão vermifugados antes de iniciar o protocolo de pesquisa.

As amostras de sangue serão protegidas da luz com papel alumínio e centrifugadas a 3500 rpm por 15 minutos para separar o soro do coágulo. Todas as centrifugações serão feitas na hora seguinte à coleta de sangue e usando uma centrífuga. O soro será aliquotado em frascos criogênicos estéreis e armazenados a -80 °C no laboratório.

Em relação às amostras de leite, 2 alíquotas serão preparadas em 2 criotubos e armazenadas a +4°C no campo e a -80°C no laboratório.

Um questionário administrado por entrevistador permitirá a coleta de informações básicas e dados dietéticos dos pares mãe-bebê. A ingestão dietética de pares mãe-bebê será avaliada por meio de 2 recordatórios alimentares quantitativos de 24 horas em dias não consecutivos (FAO, 2018). A Diversidade Alimentar Mínima para Mulheres (MDD-W) também será determinada a partir dos recordatórios alimentares de 24 horas. Para crianças, os indicadores de práticas de alimentação de lactentes e crianças pequenas serão avaliados de acordo com as últimas recomendações da OMS/UNICEF (OMS/UNICEF, 2021).

Medidas antropométricas serão realizadas para avaliar o estado nutricional da dupla mãe-bebê de acordo com procedimentos padronizados.

Análise de amostra:

A concentração sérica de Retinol será feita por HPLC. A abundância natural de 13C no soro e no leite será medida por Espectrometria de Massas por Cromatografia Gasosa-Combustão-Isótopos (GC-C-IRMS). A PCR e AGP serão dosadas pelo analisador automático Biosystems A15. Os ésteres de retinil e os carotenóides séricos serão obtidos por Cromatografia Líquida de Ultra Performance (UPLC).

A anemia será avaliada medindo a hemoglobina (Hb) no sangue total usando um sistema HemoCue (Hb-301) e o teste de malária será realizado usando os testes SD BIOLINE Malaria Antigen P.f/Pan1.

Análises adicionais serão feitas em amostras de saliva em uma subamostra do par mãe-filho para medir a produção de leite pelo método de diluição de isótopos de deutério em dose mãe. O enriquecimento de deutério das amostras de saliva será medido com um espectrômetro de infravermelho com transformada de Fourier (FTIR Shimadzu IR Affinity, Kyoto, Japão).

Modelagem da cinética do retinol entre mães:

As concentrações de retinol no soro e no leite materno e os dados de enriquecimento de isótopos serão usados ​​para gerar conjuntos de dados de supermulheres. A análise compartimental baseada em modelo será aplicada a dados de rastreadores de isótopos de super mulheres para enriquecimento de soro e leite materno usando modelos estabelecidos para o metabolismo da vitamina A (Green et al., 2020; Gannon et al., 2018) e expandindo esses modelos para incorporar a transferência de rastreadores ao leite materno.

Determinação dos fatores Fa e S:

Os resultados da análise compartimental baseada em modelo incluem estimativas para taxas de transferência de vitamina A entre compartimentos com base fisiológica e os resultados resultantes do modelo; massa traçada total, meia-vida, taxa catabólica fracional, taxa de eliminação, tempo de equilíbrio e partição soro/traçador corporal (fator S). Usando suposições de absorção, a quantidade de dose de traçador absorvida e armazenada no momento da amostragem (relacionada ao fator Fa e outros coeficientes de equação relacionados) será determinada.

Cálculo TBS:

Equação de balanço de massa: A razão isotópica de traçador para traçado (TTR) (retinol não marcado) no soro será usada para estimar os estoques VA corporais totais (TBS) usando a seguinte equação com suposições apropriadas:

TBS (μmol)= a × 1/TTR× (fatores para correção de absorção e armazenamento) a é a equação RID da quantidade de dose: TBS (μmol)= Fa × S × (1/〖SAp〗) Fa é a fração do dose de traçador oral absorvida e retida nas reservas S é a relação entre a atividade específica do retinol (retinol marcado/retinol não marcado) no plasma e aquela no fígado após o equilíbrio da dose SAp é a atividade específica do retinol (retinol marcado/retinol não marcado) no plasma .

Para as mães, Fa e S serão calculados usando modelagem matemática, enquanto o SAp será determinado analiticamente. Entre as crianças, serão usados ​​valores genéricos para Fa e S.

Análise estatística:

A entrada de dados e o controle de qualidade serão realizados usando Epi infoTM 7.2.3.1, Epi infoTM 3.5.1 (Centros de Controle e Prevenção de Doenças) e Microsoft Excel 2016 (Microsoft Corporation). A análise estatística será realizada usando STATA/SE 14.0 (STATA Corporation). A análise descritiva será utilizada para tabular as características da população do estudo. Variáveis ​​categóricas serão expressas como porcentagens, e variáveis ​​contínuas como média ± DP para variáveis ​​normalmente distribuídas e mediana com intervalo interquartílico para valores assimétricos. O teste t de Student bicaudal, o teste t pareado ou a análise de variância (ANOVA) de uma via seguido pelos testes de comparação post-hoc de Bonferroni serão usados ​​para comparar as médias, enquanto o teste de Wilcoxon rank-sum será usado para comparar as medianas. O teste do qui-quadrado de Pearson, o teste exato de Fisher ou o teste do qui-quadrado de McNemar serão usados ​​para comparar porcentagens. Testes de concordância apropriados serão realizados. Todas as etapas da análise estatística serão realizadas por um estatístico experiente, utilizando metodologia apropriada para garantir resultados adequados e confiáveis.