Étude d'embryons anormalement fertilisés (SAFE)
Étude d'observation prospective de la morphokinétique et de la ploïdie des blastocystes avec une fécondation anormale (1pn, 2,1pn et 3pn) pour identifier l'origine des altérations de fécondation
Le but de cette étude observationnelle est de déterminer le taux de diploïdie des embryons haploïdes et triploïdes à partir de cycles de fécondation in vitro (FIV). Les principales questions auxquelles il vise à répondre est:
- Une fécondation génétique moléculaire peut-elle contrôler les embryons anormalement fécondés pour étendre les possibilités pour les couples subissant un traitement de reproduction assisté?
- La perte ou le gain chromosomique est-il présent dans des embryons anormalement fertilisés principalement d'origine maternelle?
À cette fin, nous évaluerons la morphokinétique et la ploïdie d'environ 300 embryons avec différents types de modèles pronucléaires anormaux (1pn, 2,1pn et 3pn) qui atteignent l'étape du blastocyste. Dans la mesure du possible, les embryons avec un complément chromosomique non diploïde seront également évalués pour déterminer l'origine (maternelle ou paternelle) de l'ensemble chromosomique qui a été perdu ou gagné.
Les sujets de l'étude suivront leur traitement IVF / ICSI précédemment planifié et aucune visite / interventions supplémentaires ne sera nécessaire pour participer.
Aperçu de l'étude
Statut
Les conditions
Intervention / Traitement
Description détaillée
Les chromosomes sont des structures cellulaires contenant la majorité des informations génétiques d'un organisme vivant. Les gamètes (ovocytes et spermatozoïdes) ne contiennent qu'un seul ensemble de 23 chromosomes dans des structures appelées pronucléi (PN). Lors de la fertilisation, les 23 chromosomes de l'ovocyte et les 23 chromosomes du sperme se combinent pour former un zygote de 2 pn, qui contient un total de 46 chromosomes.
Dans les laboratoires de reproduction assistée (ART), les embryologues peuvent déterminer par évaluation morphologique si le processus de fertilisation était normal (2pn) ou anormal (0pn, 1pn ou> 2pn). Pour un traitement artistique, seul un ovocyte fertilisé réussi (2pn) qui se développe au stade blastocyste peut convenir au transfert d'embryons. Cependant, des études antérieures ont démontré que certains embryons des ovocytes à fécondation anormale peuvent posséder une teneur chromosomique normale et pourraient être utilisés dans les arts lorsque des embryons de fertilisation normale ne sont pas disponibles.
Il existe des techniques d'analyse génétique pour déterminer non seulement si un embryon est euploïde (contient un nombre normal de chromosomes) mais aussi pour évaluer s'il est haploïde, diploïde ou triploïde (1pn, 2,1pn et 3pn respectivement). Ces techniques peuvent être appliquées à des embryons de «sauvetage» avec une fécondation anormale qui sont actuellement rejetées. Cette approche pourrait être bénéfique pour les patients atteints de FIV avec un nombre limité d'embryons viables disponibles (diminution des cas de réserve ovarienne, âge maternel avancé, mauvaise réponse à la stimulation ovarienne, etc.).
L'étude prospective et observationnelle actuelle a été approuvée par le comité d'éthique de la recherche compétent et chaque participant potentiel sera invité à signer le consentement éclairé de l'étude.
Les 300 embryons qui feront partie de l'étude seront recrutés dans le laboratoire du Centre de collaboration le jour de la fertilisation après avoir effectué les procédures conventionnelles de la FIF. Après ces mêmes procédures de routine, les échantillons biologiques des deux parents seront également stockés pour effectuer l'analyse génétique afin de déterminer l'origine des anomalies chromosomiques. Une biopsie sera tirée des embryons sélectionnés lorsqu'il atteindra le stade de blastocyste pour l'analyse génétique qui permettra de détecter s'il existe en effet une anomalie chromosomique. Tous les embryons non confirmés comme chromosomiques normaux seront décongelés, lavés et cultivés pour une deuxième biopsie pour confirmer leur diagnostic précédent et l'origine des anomalies chromosomiques. Pour cette nouvelle analyse, en plus des biopsies, des échantillons individuels des milieux de culture des blastocystes décongelés seront collectés et stockés. Des échantillons seront expédiés à Igenomix pour la recherche génétique et une analyse des données supplémentaires.
La durée prévue de l'étude est de 18 mois. Les embryons seront inclus dans le centre participant pendant une période estimée à 13 mois. L'implication des participants dans l'étude est simplement liée au moment de la signature du formulaire de consentement. Exceptionnellement, les embryons de la fertilisation anormale qui ont été informés comme chromosomique normale après la première biopsie peuvent être considérés comme transférés à condition qu'il n'y ait pas d'autres embryons disponibles. Si la patiente décide de procéder au transfert, son suivi clinique fera partie de l'étude jusqu'à la grossesse en cours (12 semaines de gestation). Après cela, sa participation à l'étude prendra fin, mais son médecin continuera de surveiller la grossesse jusqu'à l'accouchement, le cas échéant, conformément à la pratique clinique standard.
Type d'étude
Inscription (Estimé)
Contacts et emplacements
Coordonnées de l'étude
- Nom: Carlos A Gomez De La Cruz, BSc MSc
- Numéro de téléphone: +34963905310
- E-mail: carlos.gomez@igenomix.com
Lieux d'étude
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Valencia
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Valencia, Valencia, Espagne, 46015
- Recrutement
- Equipo Médico Crespo Valencia
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Contact:
- Jose Teruel López, BSc MSc
- Numéro de téléphone: +34 961 042 557
- E-mail: jteruel@juanacrespo.es
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Chercheur principal:
- María Escribá Suarez, BSc MSc
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Chercheur principal:
- Marina Benavent Martínez, BSc MSc
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Critères de participation
Critère d'éligibilité
Âges éligibles pour étudier
- Adulte
Accepte les volontaires sains
Méthode d'échantillonnage
Population étudiée
La description
Critères d'inclusion:
- Les patients artistiques qui signent le consentement éclairé de l'étude.
- Âge: ovocytes de femmes ≤ 49 ans et sperme des hommes ≤ 60 ans. Le don de gamètes est autorisé.
- ≥ 1 blastocystes des ovocytes avec un motif pronucléaire anormal (1pn, 2,1pn et / ou 3pn) et avec la présence de 2 corps polaires (PB), cultivés dans un incubateur en accéléré.
Critères d'exclusion:
- Aucun critère d'exclusion n'a été pris en compte pour cette étude.
Plan d'étude
Comment l'étude est-elle conçue ?
Détails de conception
Cohortes et interventions
Groupe / Cohorte |
Intervention / Traitement |
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Blastocystes des ovocytes anormalement fertilisés pendant la reproduction assistée
Au cours des procédures conventionnelles ICSI / FIV en laboratoire, l'embryologiste observant la fécondation identifiera les embryons avec un schéma pronucléaire anormal et les préservera pour l'étude. Ces embryons seront cultivés dans un incubateur en accéléré suivant la pratique standard du laboratoire. Tous les paramètres morphocinétiques enregistrés, ainsi que les images correspondants, seront documentés. Chaque embryon sera surveillé, sa qualité de développement évaluée et enregistrée pour déterminer si elle atteint l'étape des blastocystes. Si c'est le cas, les chercheurs contacteront le patient pour demander le consentement que ces embryons soient inclus dans l'étude. Les embryons avec un schéma pronucléaire anormal qui ne parvient pas à atteindre le stade de blastocyste en raison d'un blocage de développement seront rejetés. Aucun médicament ou dispositif médical ne sera utilisé. |
Sur la fertilisation, après la procédure ICSI / FIV conventionnelle, les échantillons de cellules de cumulus (obtenus pendant le processus de dénudation des ovocytes de routine) et les spermatozoïdes excédentaires présents dans le plasma séminal seront récupérés. Ces échantillons seront stockés congelés à -20 ° C jusqu'à ce qu'ils soient envoyés à Igenomix. Là, ils seront utilisés pour effectuer l'analyse génétique requise pour atteindre les objectifs de l'étude, à condition que le patient soit consentant à participer. Si le patient choisit finalement de ne pas participer, ces échantillons seront détruits. Les parents peuvent être invités à fournir un échantillon de salive dans le même but dans les cas où l'obtention des échantillons pendant la fertilisation n'était pas possible ou si les échantillons prélevés ne sont pas adaptés au traitement en laboratoire. L'échantillon de salive peut être prélevé à la clinique lors de l'une des visites prévues pour un traitement reproducteur ou, alternativement, par les parents à la maison à l'aide d'un kit fourni par la clinique.
Le jour 3 du développement, l'éclosion assistée sera effectuée pour faciliter la biopsie au stade des blastocystes.
Chaque embryon sera biopsié en laboratoire en utilisant des techniques de biopsie conventionnelles de trophectoderme (TE) le jour +5, +6 ou +7 de développement, selon le moment où ils atteignent le stade de blastocyste approprié.
Après la biopsie, le blastocyste sera vitrifié après le protocole de routine clinique et le stockage jusqu'à ce que les résultats génétiques soient disponibles.
Les échantillons de biopsie seront placés dans un tube de PCR marqué avec son code spécifique à l'étude correspondant et stocké dans une grille froide à 4 ° C avant d'être transféré sur un congélateur à -20 ° C.
Enfin, les échantillons seront envoyés à l'igénomix pour des tests génétiques de préimplantation pour l'aneuploïdie.
Après avoir obtenu les résultats de la PGT-A, tout embryon n'est pas génétiquement confirmé comme des anomalies euuploïdes et sans ploïdie sera décongelée, lavée et cultivée pour la régéopsie. Une analyse complémentaire utilisant des techniques de séquençage de nouvelle génération (NGS) sera effectuée pour confirmer le diagnostic et déterminer l'origine des anomalies. Pour cette analyse supplémentaire, en plus des nouvelles biopsies, le milieu de culture individuel de chaque embryon sera aspiré après une période d'incubation de 8 à 24 heures. Le milieu collecté sera placé dans des tubes de PCR et stockés dans un congélateur à -20 ° C avant d'être envoyé au laboratoire. Quel que soit le résultat de ces analyses complémentaires, aucun blastocyste Rebiopsié ne sera pris en compte à des fins cliniques. |
Que mesure l'étude ?
Principaux critères de jugement
Mesure des résultats |
Description de la mesure |
Délai |
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Taux de diploïdie dans des embryons haploïdes de la FIV / ICSI
Délai: 3 mois
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Nombre de blastocystes 2pn à partir d'ovocytes anormalement fertilisés (1pn)
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3 mois
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Taux de diploïdie dans les embryons triploïdes de la FIV / ICSI
Délai: 3 mois
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Nombre de blastocystes 2pn à partir d'ovocytes anormalement fertilisés (2,1pn et 3pn)
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3 mois
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Mesures de résultats secondaires
Mesure des résultats |
Description de la mesure |
Délai |
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Origine des anomalies chromosomiques dans les embryons avec une teneur chromosomique non diploïde
Délai: 6 mois
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Pour déterminer l'origine (maternelle ou paternelle) de l'ensemble chromosomique qui a été perdu ou gagné.
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6 mois
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Taux de grossesse des embryons euploïdes de la fertilisation anormale
Délai: 2 semaines après le transfert d'embryons
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Nombre de patients avec un taux sérique positif de la gonadotrophine chorionique β-humaine (βHCG> 25 MIU / ml) par transfert d'embryons.
Le bêta-HCG sera mesuré au jour 12 ± 2 après le transfert d'embryons.
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2 semaines après le transfert d'embryons
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Taux d'implantation des embryons euploïdes de la fertilisation anormale
Délai: Jusqu'à 4 semaines après le transfert d'embryon
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Nombre de sacs gestationnels observés par échographie vaginale divisée par le nombre d'embryons transférés.
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Jusqu'à 4 semaines après le transfert d'embryon
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Taux de grossesse biochimique des embryons euploïdes de la fertilisation anormale
Délai: 4 semaines après le transfert d'embryons avec des embryons euploïdes de la fertilisation anormale
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Nombre de grossesses diagnostiquées uniquement par détection de β-HCG sans sac gestationnel visualisé par échographie vaginale, par nombre de grossesses.
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4 semaines après le transfert d'embryons avec des embryons euploïdes de la fertilisation anormale
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Taux de grossesse extra-utérine des embryons euploïdes de la fertilisation anormale
Délai: 4-5 semaines après le transfert d'embryon
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Nombre de grossesses en dehors de la cavité utérine, diagnostiquée par échographie, visualisation chirurgicale ou histopathologie, par nombre de grossesses.
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4-5 semaines après le transfert d'embryon
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Taux de fausse couche clinique des embryons euploïdes de la fertilisation anormale
Délai: Jusqu'à 12 semaines de gestation
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Nombre de pertes de grossesse spontanées avant la semaine 12, dans laquelle un SAC / S gestationnel a été observé précédemment, par nombre de grossesses.
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Jusqu'à 12 semaines de gestation
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Taux de grossesse en cours des embryons euploïdes de la fécondation anormale
Délai: Plus de 12 semaines de gestation
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Nombre de grossesses jusqu'à 12 semaines de gestation (au moins un fœtus avec un rythme cardiaque perceptible diagnostiqué) pour chaque transfert d'embryons.
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Plus de 12 semaines de gestation
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Taux de terminaison volontaire des embryons euploïdes de la fertilisation anormale
Délai: Jusqu'à 12 semaines de gestation
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Nombre de terminaisons volontaires avant la semaine 12 par nombre de grossesses.
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Jusqu'à 12 semaines de gestation
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Collaborateurs et enquêteurs
Parrainer
Les enquêteurs
- Chercheur principal: Pere Mir Pardo, PhD, Igenomix
- Chercheur principal: Carmen Rubio Lluesa, PhD, Igenomix
Dates d'enregistrement des études
Dates principales de l'étude
Début de l'étude (Réel)
Achèvement primaire (Estimé)
Achèvement de l'étude (Estimé)
Dates d'inscription aux études
Première soumission
Première soumission répondant aux critères de contrôle qualité
Première publication (Réel)
Mises à jour des dossiers d'étude
Dernière mise à jour publiée (Réel)
Dernière mise à jour soumise répondant aux critères de contrôle qualité
Dernière vérification
Plus d'information
Termes liés à cette étude
Mots clés
Termes MeSH pertinents supplémentaires
Autres numéros d'identification d'étude
- EJC-SAFE-24-02
Plan pour les données individuelles des participants (IPD)
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