Les miRNA pourraient-ils être utilisés comme marqueurs pour distinguer les testicules non descendus des testicules rétractiles (miRNA)

1. Introduction Les testicules non descendus (TND) sont la malformation congénitale masculine la plus fréquente, touchant 1,0 à 4,6 % des nouveau-nés à terme et jusqu'à 45 % des prématurés [1]. Le TND peut être congénital ou acquis ; la descente spontanée dans les cas congénitaux est rare après six mois [2]. Un TND non traité au-delà d'un an entraîne une fibrose interstitielle, une spermatogenèse dégénérée et un risque accru d'infertilité [3-5]. De plus, les TND non traités comportent des risques de cancer du testicule (CT) et de torsion testiculaire (TT) accrue. Un diagnostic et un traitement précoces sont cruciaux pour prévenir ces complications.

   Différencier les vrais testicules non descendus (TND) des testicules rétractiles (TR) est cliniquement difficile. Un vrai TND implique un scrotum constamment vide, les testicules ne descendant jamais. À l'inverse, les TR peuvent descendre spontanément ou être réduits manuellement, bien qu'ils puissent remonter. Le traitement du TR dépend du temps passé hors du scrotum. Un diagnostic erroné de TND comme TR risque de retarder le traitement et d'entraîner des complications inévitables. Ainsi, des indicateurs fiables pour distinguer les TND et les TR sont cruciaux.

   Les microARN (miARN) sont des ARN non codants d'environ 22 nucléotides qui régulent l'expression génique post-transcriptionnellement [6]. Les miARN sont connus pour réguler la spermatogenèse (SP), le développement embryonnaire précoce, la fonction des spermatozoïdes et la fécondation chez diverses espèces [7]. Compte tenu de la perturbation attendue de la SP dans les vrais TND, la relation TND-miARN a été explorée. Des études ont montré des niveaux modifiés de miARN dans le TND : le miR-210 est surexprimé [8], tandis que le miR-449a et le miR-34c sont sous-exprimés [9-11]. De manière critique, les données sur les changements de miARN dans les cas de testicule rétractile (TR) font actuellement défaut. Théoriquement, la SP n'est pas censée être perturbée dans le TR. Ainsi, les altérations des miARN, reflétant l'état de la SP, pourraient différencier le TR du TND, guidant les décisions chirurgicales versus le suivi. Cette étude a comparé prospectivement les changements de miARN entre les groupes TND, TR et témoins normaux.

2. Matériel et méthodes 2.1. Taille de l'échantillon Cette étude est conçue comme un essai contrôlé prospectif pour comparer les changements de miARN entre les groupes TND, TR et témoins normaux. La taille de l'échantillon a été déterminée via G*Power 3.1.9.6. Une analyse de puissance ANOVA à un facteur pour le miR-34c, qui comparait trois groupes, a utilisé une taille d'effet (f=1,2955357) d'une étude précédente [10]. Pour atteindre une puissance de 99 % et un taux d'erreur de 1 %, un échantillon total de 24 était nécessaire. Pour augmenter la confiance, l'étude a finalement inclus 30 patients, répartis en trois groupes de 10.

2.2. Population de patients Initialement, 10 garçons avec des testicules non descendus (TND), 10 avec des testicules rétractiles (TR) et 10 volontaires sains (témoins) de notre clinique d'urologie (dates entre mars 2022 et mars 2023) ont été inclus. Cependant, un patient TR et un patient témoin ont été exclus en raison du refus parental pour le prélèvement sanguin. Seuls les cas de TND palpables (unilatéraux ou bilatéraux) ont été inclus, excluant les types non palpables. Pour assurer un diagnostic précis de TR, des examens médicaux initiaux ont été effectués dans trois positions (décubitus dorsal, semi-dorsal, debout), suivis d'un examen parental d'un mois (deux fois par jour). Seuls les patients TR dont les testicules passaient >50 % de leur temps dans le scrotum ont été inclus. Les critères d'exclusion comprenaient également une chirurgie inguinale/scrotale antérieure, des jeux de données défectueux ou des échantillons de sérum inappropriés.

2.3. Collecte des données des patients et des échantillons témoins Des antécédents détaillés des patients, des examens physiques et des tests biochimiques de routine ont été effectués. Les échantillons sanguins de TND ont été prélevés avant la chirurgie pour éviter une interprétation erronée. Le sang de tous les groupes a été collecté dans des tubes de biochimie de 5 mL et centrifugé à 3000 tr/min pendant 10 minutes. Le sérum exempt de particules résultant a été transféré dans des tubes de 1,5 mL et stocké à -80 °C jusqu'à l'analyse.

2.4. Validation des niveaux d'expression du miR-210, miR-449a et miR-34c par PCR en temps réel Les échantillons de sérum de la clinique d'urologie ont été soumis à une isolation d'ARN via le Quick-cfRNA™ Serum & Plasma Kit (Zymo Research). Le miARN extrait a été rétrotranscrit en ADNc via le miRNA All-In-One cDNA Synthesis Kit (ABMGood). La qualité et la quantité de l'ADNc ont été évaluées par spectrophotométrie avec un instrument BioSpec-nano (Shimadzu) avant la PCR en temps réel. L'analyse de l'expression des miARN a été réalisée via un instrument Rotor Gene Q (Qiagen). Les niveaux de miR-210, miR-449a et miR-34c ont été quantifiés avec des amorces prêtes à l'emploi et le BlasTaq™ 2X qPCR MasterMix (ABMGood).

2.5. Analyse statistique La normalité des données a été évaluée via le test de Shapiro-Wilk, et l'égalité des variances via le test de Levene. Les statistiques descriptives sont présentées sous forme de moyennes ± ET pour les données paramétriques et de médianes (écarts interquartiles) et moyennes (rangs) pour les données non paramétriques. Pour les comparaisons de groupes, l'ANOVA à un facteur a été utilisée pour les données paramétriques, et le test de Kruskal-Wallis pour les données non paramétriques, suivi de la correction de Dunn-Bonferroni pour les comparaisons multiples post hoc. Le coefficient de corrélation de rang de Spearman a été utilisé pour analyser les corrélations. La signification statistique a été fixée à p < 0,05.

L'expression des miARN a été quantifiée par qRT-PCR via les valeurs Ct (point de croisement) et normalisée à RNU6B_13. Les niveaux d'expression relatifs des miARN ont été comparés entre tous les groupes via la méthode 2-ΔCt et calculés comme 2Ct (gène cible) - Ct (gène de référence). Toutes les analyses statistiques ont été réalisées via IBM SPSS v28 (IBM Inc., Chicago, IL, USA).