Indagine prospettica sullo stress ossidativo nell'infezione da virus del Nilo occidentale (PROWENI)

WNND

Saranno reclutati 40 soggetti con malattia neuroinvasiva del Nilo occidentale

WNF

Saranno reclutati 40 soggetti con febbre del Nilo occidentale

controlli

Verranno reclutati 20 controlli. Questi controlli avranno un'età abbinata ai casi.

Misurare lo stato redox

Verranno calcolati indici multiparametrici di stress ossidativo per misurare e riassumere lo stato redox nei casi e nei controlli appaiati per età. Sarà indagata l'associazione tra lo stato redox e gli esiti clinici, neuropsicologici e radiologici. Esamineremo anche la sensibilità relativa di biomarcatori separati di stress ossidativo e autofagia come predittori clinici della gravità dell'infezione da WNV.

Valutazione dei deficit neurologici

Come parte dell'analisi descrittiva dei biomarcatori della gravità della malattia e per studiare le sequele neurologiche dell'infezione da WNV. Verranno valutati: valutazioni specifiche dei nervi cranici II-XII, forza motoria negli arti superiori e inferiori, test sensoriali per punture di spillo e vibrazioni, riflessi tendinei profondi, andatura, coordinazione e anomalie del movimento

Prestazioni neuropsicologiche

Studiare le sequele neuropsicologiche dell'infezione da WNV durante un periodo di follow-up di 12 mesi nei seguenti domini chiave: attenzione, memoria, funzione esecutiva, emozione e cognizione sociale, velocità psicomotoria

Valutazione longitudinale dello stato funzionale Studiare le sequele neurologiche e neuropsicologiche dell'infezione da WNV durante un periodo di follow-up di 12 mesi.

ECOG/WHO PS durante un follow-up di 12 mesi.

Anomalie della risonanza magnetica

Parte dell'analisi descrittiva dei marcatori clinici della gravità della malattia

Contenuto di ferro nel cervello

Parte dell'analisi descrittiva dei marcatori clinici della gravità della malattia: analisi qualitativa per regione neuroanatomica mediante sequenza MRI sensibile al ferro (SWI)

Anomalie oftalmologiche

Come parte dell'analisi descrittiva dei marcatori clinici della gravità della malattia, le anomalie oftalmologiche saranno valutate mediante esame con lampada a fessura

concentrazione sierica di S100b

Come parte dell'analisi descrittiva dei marcatori clinici della gravità della malattia, la concentrazione di S100b sarà misurata per valutare l'integrità della barriera emato-encefalica

concentrazione sierica di NSE

Come parte dell'analisi descrittiva dei marcatori clinici della gravità della malattia, la concentrazione di NSE sarà misurata per valutare l'integrità della barriera emato-encefalica

Analisi delle caratteristiche delle prestazioni di laboratorio (ad es. sensibilità) di RT-PCR specifica per WNV e isolamento virale in campioni clinici, rispetto alla diagnosi composita dell'infezione da WNV

L'infezione da WNV confermata è definita come uno o più dei seguenti criteri:

1. Sieroconversione degli anticorpi IgG anti-WNV (test di immunofluorescenza indiretta (IIFT) Flavivirus 2, Euroimmun®, Lubecca, Germania) nel siero di convalescenza (20 giorni dopo l'insorgenza dei sintomi) (tutti i partecipanti)
2. Aumento di 4 volte degli anticorpi IgG anti-WNV nel siero di convalescenza, rispetto al campione di screening (IIFT).
3. Rilevazione di anticorpi IgM anti-WNV (ELISA) nel CSF* (al VBH) (*CSF campionato solo quando clinicamente indicato).
4. Risultato RT-PCR specifico per WNV positivo nel siero, nelle urine o nel liquido cerebrospinale nei campioni ottenuti allo screening.
5. Isolamento del virus mediante saggio di crescita in campioni ottenuti allo screening

Descrizione dell'epidemiologia molecolare dei ceppi infettanti di WNV e delle prestazioni diagnostiche della crescita virale.

Il lasso di tempo per il rilevamento del WNV dopo l'insorgenza dei sintomi mediante reazione a catena della polimerasi della trascrittasi inversa in tempo reale (RT-PCR) o l'isolamento del virus mediante crescita dal sangue o dal liquido cerebrospinale è limitato dal rapido declino del virus circolante. Poiché la finestra di rilevamento dell'RNA del WNV nelle urine può essere più lunga (fino a 14 giorni), la RT-PCR verrà eseguita su tutti i campioni clinici al momento del reclutamento. Le sequenze bersaglio sono una regione conservata nella regione 5'UTR e fanno parte del gene del capside di WNV e rilevano sia il lignaggio 1 che il 2 WNV. WNV è stato isolato con successo dall'urina, in ca. 40% dei campioni ottenuti entro 8 giorni dall'insorgenza dei sintomi. L'isolamento del WNV sarà tentato in cellule Vero E6 a basso passaggio e cellule BHK21 da campioni di urina con un elevato carico di RNA del WNV (valori di soglia del ciclo (Ct)

Identificazione di potenziali firme genetiche correlate alla virulenza (neuro-invasione e morbilità) nella nostra coorte.

Il sequenziamento dell'intero genoma (WGS) sarà eseguito su un sottoinsieme di campioni di siero, urina e CSF positivi per RT-PCR. Questo ci consentirà di studiare la compartimentazione temporale e spaziale dei lignaggi del Nilo occidentale in Romania, nonché di espandere la nostra comprensione della compartimentazione genetica all'interno degli ospiti (urina, siero, CSF). Inoltre, gli isolati ottenuti saranno sequenziati (dal saggio di crescita virale) per valutare i potenziali adattamenti che il virus subisce durante l'isolamento. Infine, in uno studio di associazione genome wide, le sequenze virali ottenute saranno confrontate con i dati clinici raccolti in modo prospettico, per identificare potenziali firme genetiche correlate con virulenza, neuroinvasione e morbilità. I nostri dati saranno confrontati con i dati esistenti sui determinanti genetici di virulenza come la presenza di un sito di glicosilazione nella proteina E, sostituzioni nelle proteine ​​non strutturali 3, 4B o 5, o variazioni nella regione 3' non codificante.