Aplotipi del fattore H del complemento e fumo nella degenerazione maculare legata all'età (CFH&AMD)

DISEGNO E METODI DELLA RICERCA A) Disegno dello studio Questo studio ha lo scopo di determinare se il fumo aumenta l'attivazione del complemento e se esistono specifici genotipi di AMD che sono particolarmente sensibili a questo livello elevato di componenti sierici del complemento.

B) Selezione di soggetti e controlli I soggetti del caso e i soggetti di controllo della stessa età (entro 5 anni) saranno reclutati in base a un protocollo approvato dai centri medici Johnson e DeBakey VA e dal comitato di revisione delle indagini umane della Medical University of South Carolina (MUSC) .

Criterio di inclusione

• Soggetti con una chiara diagnosi di AMD e almeno una vista 20/40 del fondo oculare.
• Soggetti di controllo con <5 piccole drusen dure e almeno una vista 20/40 del fondo oculare.
• Tutti i soggetti avranno la possibilità di fornire un campione di sangue, dimostrare l'assenza dei criteri di esclusione elencati di seguito, fornire il proprio consenso o disporre di un rappresentante legale disponibile per fornire il consenso, in grado di completare tutti gli aspetti del test ed essere in generale buona salute medica secondo il parere del medico dello studio.

Criteri di esclusione

• Individui che non sono in grado di fornire il consenso e che non hanno un rappresentante legale, la cui migliore acuità visiva corretta per entrambi gli occhi è inferiore a 20/40, che stanno assumendo un farmaco noto per causare retinopatia, incapaci di collaborare per completare il test e che si presentano con opacità dei media, che presentano malattie che fenotipicamente si sovrappongono all'AMD come drusen o disturbo pigmentario dell'epitelio pigmentato retinico; o fornire prove insufficienti per diagnosticare l'AMD.
• Individui che si presentano con distrofie maculari, toxoplasmosi, istoplasmosi, miopia degenerativa, corioretinopatia sierosa centrale o qualsiasi malattia o trattamento che diminuirebbe la capacità di riconoscere le drusen come fotocoagulazione laser, precedente intervento chirurgico di distacco della retina, uveite posteriore e trauma.

Dimensione del campione e stima della potenza Saranno reclutati un totale di 150 soggetti caso e 150 soggetti controllo. La dimensione del campione è stata determinata simulando statisticamente i risultati dello studio utilizzando le seguenti ipotesi: un livello alfa di 0,05; test di ipotesi a due code; e una distribuzione prevista tra i genotipi del fattore H CC, CT e TT dell'8,1%, 52% e 39,9%, rispettivamente, [1 e supponendo che circa il 35% dei soggetti siano fumatori attuali. Questa dimensione del campione fornirebbe l'85% di potenza per rilevare un fumo significativo per interazione genotipica, l'obiettivo principale di questo studio.

Reclutamento Verranno reclutati soggetti di caso e di controllo della stessa età (entro 5 anni). Il reclutamento avverrà secondo due modalità: 1) saranno chiamati o reclutati dopo la diagnosi nello studio del medico. Previo consenso firmato, a questi soggetti verrà anche chiesto di fornire informazioni sul loro stato di fumo e verrà raccolto un campione di sangue (due provette da 3 ml).

C) Misure di esito L'incidenza di AMD sarà stata determinata nella visita clinica precedente sulla base delle fotografie del fondo oculare e delle definizioni di AMD accettate. Ulteriori misurazioni dei risultati che aiuteranno a caratterizzare la gravità della malattia AMD potrebbero includere il test del campo visivo, l'OCT e gli angiogrammi con fluoresceina.

D) Analisi dei dati

• I dati assemblati come livelli sierici normalizzati dei fattori del complemento Ba, C3d e livelli di attività fD e fH saranno inizialmente valutati con statistiche univariate per assicurare che la qualità dei dati sia adeguata per ulteriori analisi. L'associazione tra ciascun parametro misurato (cioè i livelli sierici dei fattori del complemento), la diagnosi di AMD, il genotipo e il fumo sarà valutata in modo bivariato stratificato utilizzando i test t di Student o i test della somma dei ranghi di Wilcoxon, a seconda dei casi, e verranno utilizzate le valutazioni delle misure standard per verificare la normalità, l'inclinazione, ecc.
• Le analisi multivariate saranno condotte attraverso l'uso di modelli misti lineari generali [5]. I modelli includeranno effetti soggetti casuali per tenere conto della dipendenza tra misurazioni ripetute dei soggetti. Questo tipo di modello è ideale quando ci sono più misurazioni sui soggetti, come quando le misurazioni di laboratorio vengono eseguite in triplice copia. Le variabili dipendenti di interesse saranno le misurazioni del livello del complemento (log trasformato, se necessario), mentre le variabili indipendenti includeranno lo stato AMD (caso/controllo), il genotipo del fattore H (CC, CT, TT), il fumo (attuale, precedente, mai ) e un termine di interazione che coinvolge il genotipo del fattore H e l'abitudine al fumo. Il termine di interazione ci aiuterà a determinare se l'impatto del genotipo del fattore H e del fumo sui livelli sierici di complemento è lineare (additivo) o non lineare (ad esempio, moltiplicativo). Il modello includerà anche aggiustamenti per età, sesso e razza, che possono tutti influenzare i fattori del complemento. Pertanto, eventuali differenze tra gli aplotipi verranno adattate (corrette) per gli effetti che possono essere attribuiti all'età, al sesso o alla razza. Verranno esaminate diverse strutture di correlazione per gli effetti del soggetto casuale e gli investigatori utilizzeranno il criterio informativo di Akaike per selezionare il modello più appropriato. Le analisi secondarie comporteranno l'esclusione dei non fumatori, per valutare la natura dell'associazione (se presente) tra le storie di branco/anno. genotipi del fattore H. e i loro livelli di complemento. Sarà condotta un'ulteriore analisi (utilizzando la regressione logistica condizionale) per determinare se il fumo interagisce con il genotipo del fattore H di un soggetto rispetto al rischio di AMD. Ancora una volta, questo modello sarà aggiustato per età, sesso e razza, ei risultati saranno espressi come odds ratio associati al rischio di AMD.

E) Rischi potenziali

• I soggetti avranno ricevuto un esame oculistico completo che non faceva parte di questo studio. I rischi potenziali non possono essere descritti.
• Venipuntura per sangue intero. I rischi della venipuntura sono dolore o lividi nella sede della venipuntura; svenimento o vertigini; o infezione nel sito della puntura dell'ago. Nessuna di queste è una perdita permanente o sostanziale. Il personale clinico è formato per affrontare queste complicazioni.
• Informazione personale. La condivisione di informazioni personali (campioni di sangue, storia personale, informazioni genetiche, ecc.) non è priva di rischi. La ricerca per identificare i geni che causano o contribuiscono a una malattia o tratto è un modo sempre più importante per cercare di comprendere il ruolo dei geni nella malattia umana. Ai partecipanti è stato fornito un modulo di consenso perché gli investigatori del Johnson and DeBakey VA Medical Centers vogliono includere il campione di sangue dei partecipanti in un progetto di ricerca o perché vogliono salvare tali campioni biologici per ricerche future.

Ci sono molte cose che i partecipanti dovrebbero sapere prima di permettere che il sangue venga studiato o salvato.

• I campioni di sangue verranno archiviati sotto un identificatore alfanumerico che potrebbe eventualmente essere collegato ai partecipanti.
• Oltre al nome, altre informazioni sui partecipanti potrebbero essere collegate ai campioni di sangue.
• Le informazioni genetiche sui partecipanti si applicano spesso ai membri della famiglia.
• I partecipanti hanno il diritto di rifiutarsi di permettere che il loro sangue venga studiato o conservato per futuri studi di ricerca.
• La legge della Carolina del Sud impone che le informazioni genetiche, ottenute da qualsiasi test o da questa ricerca, siano mantenute riservate.
• La ricerca genetica solleva domande difficili sull'informazione dei partecipanti e di altri soggetti di qualsiasi risultato o di risultati futuri.
• Se i partecipanti sono preoccupati per una potenziale malattia genetica, il partecipante e il proprio medico potrebbero scegliere di testare specificamente per questo. Ciò richiederebbe ulteriori campioni di sangue o tessuto e non farebbe parte di questo progetto di ricerca.
• La presenza di un marcatore genetico per una malattia non significa necessariamente che i partecipanti svilupperanno quella malattia.

Rischi sconosciuti. I ricercatori faranno sapere ai partecipanti se vengono a conoscenza di qualcosa che potrebbe cambiare idea sulla partecipazione a questo studio.