Uso della cinetica morfologica time-lapse nella selezione delle blastocisti (Embryoscope)

Materiali e metodi:

Selezione del paziente:

Ai pazienti sottoposti a un ciclo di fecondazione in vitro presso la clinica di endocrinologia riproduttiva e infertilità della Cleveland Clinic con il piano per il trasferimento di embrioni verrà offerta l'opportunità di partecipare a questo studio. Vorremmo un arruolamento totale di 300 pazienti con 150 in ciascun gruppo. Gli unici pazienti esclusi saranno quelli sottoposti a test genetico preimpianto e/o screening cromosomico.

Disegno dello studio Questo sarà uno studio prospettico randomizzato controllato in cui tutti i pazienti che accettano di partecipare saranno randomizzati per avere la selezione degli embrioni per il trasferimento basata esclusivamente su criteri convenzionali o in alternativa criteri convenzionali in combinazione con criteri morfocinetici.

Iscrizione:

I pazienti saranno arruolati presso il centro Beachwood IVF dai medici REI al momento della consultazione IVF. Firmeranno il consenso informato per lo studio nel momento in cui firmeranno il consenso per il trattamento di fecondazione in vitro, che viene eseguito dagli infermieri della fecondazione in vitro. Il consenso informato per lo studio sarà conservato nella cartella clinica del paziente nel centro Beachwood IVF insieme al consenso alla fecondazione in vitro.

Randomizzazione:

I pazienti saranno randomizzati 1: 1 alla selezione embrionale convenzionale rispetto alla selezione embrioscopica utilizzando una sequenza di numeri casuali generata dal computer. L'assegnazione di gruppo sarà scritta su un pezzo di carta e inserita in buste opache numerate progressivamente dal personale di ricerca non coinvolto nella selezione degli embrioni. Ad ogni paziente randomizzato verrà assegnato il numero consecutivo successivo e i criteri di selezione degli embrioni verranno rivelati al momento del prelievo degli ovociti. I pazienti, i medici e il personale REI e gli ecografisti saranno ciechi su come vengono selezionati gli embrioni. Solo l'embriologo e il personale di laboratorio sapranno in quale gruppo sono stati randomizzati i pazienti. Ciò sarà garantito non inserendo il gruppo nella cartella clinica informatizzata o nella cartella clinica, ma solo nella cartella del laboratorio e nella banca dati della ricerca.

Giustificazione della dimensione del campione Sono disponibili pochi dati pubblicati sull'imaging time-lapse e sulla selezione di embrioni umani per il trasferimento. Su EmbryoScope non sono disponibili pubblicazioni di studi controllati randomizzati. Lo statistico Benjamin Nutter è stato consultato per la stima della dimensione del campione. Inizialmente, sulla base dei risultati del 2012, c'era un tasso di gravidanza del 49%. Per una potenza dell'80%, al fine di rilevare un aumento al 55% dei tassi di gravidanza secondo le nuove linee guida di selezione, avremmo bisogno di randomizzare 1088 pazienti. Per vedere un aumento al 60% dei tassi di gravidanza, avremmo bisogno di randomizzare 320 pazienti.

In questo studio, ci concentreremo su quei pazienti che hanno blastocisti disponibili per il trasferimento poiché i blastocisti sono gli embrioni di cui abbiamo più bisogno di assistenza con la selezione. Il tasso di gravidanza in questo sottogruppo di pazienti è attualmente del 70% e per rilevare un aumento all'80% sarebbe necessaria la randomizzazione di 231 pazienti. Sulla base di questi numeri, riteniamo ragionevole iniziare con un obiettivo di 300 pazienti in questo studio poiché ci saranno alcuni pazienti che non ce la faranno al recupero, alcuni che non hanno fecondazione e altri che non hanno embrioni che progrediscono per il trasferimento. Si spera che iniziare con un obiettivo di 300 pazienti ci fornisca un campionamento sufficientemente ampio per eseguire un'analisi preliminare degli embrioni che si traduca in una gravidanza clinicamente evidente come definita dalla frequenza cardiaca fetale positiva.

Dato che il risultato di questo studio è il tasso di gravidanza, valuteremo i dati raccolti dopo sei mesi per valutare se esiste una chiara differenza tra i gruppi. Se c'è una differenza significativa in quel momento, lo studio può essere interrotto per consentire a tutti i pazienti di beneficiare del metodo superiore.

Procedura di ricerca I protocolli di laboratorio di fecondazione in vitro utilizzati saranno gli stessi utilizzati per tutti i pazienti. Gli ovociti saranno recuperati mediante aspirazione transvaginale dei follicoli sotto guida ecografica. Gli ovociti saranno inseminati mediante iniezione intracitoplasmatica di sperma o co-incubazione con lo sperma. La mattina successiva, gli ovociti normalmente fecondati saranno identificati e spostati nei singoli pozzetti in una camera per vetrini e collocati nell'EmbryoScope.

Quelli randomizzati alla valutazione classica avranno i loro embrioni classificati in base alla valutazione giornaliera convenzionale in determinati momenti giornalieri. Questi criteri comprendono lo sviluppo tempestivo di parametri di riferimento specifici a 20, 26, 44, 68, 92, 116 e 140 ore dopo l'inseminazione.

Le immagini proverranno dall'EmbryoScope, ma saranno statiche nel tempo e non si estenderanno su un intervallo di tempo. Gli embrioni saranno classificati e selezionati per il trasferimento secondo i criteri convenzionali del laboratorio. Quelli randomizzati alla valutazione classica più i parametri morfocinetici avranno la valutazione dell'embrione eseguita agli stessi intervalli definiti ma utilizzando il software di analisi dei dati e le immagini time-lapse acquisite per includere i tempi degli intervalli mitotici, i piani di scissione, i tempi di compattazione e cavitazione negli embrioni che portano a formazione di blastocisti.

I pazienti che scelgono di non partecipare allo studio continueranno a far coltivare i loro embrioni nell'EmbryoScope e verranno applicati i criteri convenzionali di selezione degli embrioni per identificare gli embrioni per il trasferimento.