Metilazione del DNA nel trapianto allogenico di cellule staminali emopoietiche. (MET_SCT_2018)

Il ricorso al trapianto di cellule staminali ematopoietiche (SCT) in gruppi di pazienti precedentemente non idonei per età è in progressivo aumento. Attualmente, il TCS allogenico nei pazienti di età superiore ai 60 anni rappresenta circa il 18%. Nel database europeo SCT, il numero di pazienti di età > 65 anni era <1% fino al 2000 e 6,7% dopo il 2000. Questa tendenza è la conseguenza di una crescente necessità clinica causata dal progressivo invecchiamento globale della popolazione generale e dalla crescente proporzione di soggetti con un buon performance status tra i pazienti anziani.

L'idoneità al trapianto è attualmente misurata dall'assenza delle principali comorbilità valutate dal punteggio dell'indice di comorbidità di Sorror (HCT-CI). Il punteggio correla con l'esito post-trapianto e fornisce indicazioni chiare sull'intensità della chemioterapia da somministrare in fase pre-trapianto al fine di ridurre la Non Relapse Mortality (NRM).NRM è la mortalità non dovuta alla guarigione della malattia; può derivare da tre ordini di complicanze: immunologiche (Graft versus Host Disease -GVHD-); infettive (infezioni opportunistiche) e tossiche (tossicità d'organo correlata alla chemioterapia). L'intensità del regime di condizionamento si riduce di conseguenza in presenza di comorbidità e nel paziente anziano, più frequentemente affetto da comorbidità. Ma ridurre l'intensità del regime di condizionamento significa anche aumentare significativamente la probabilità di recidiva della malattia ematologica e quindi tale riduzione deve essere fatta sulla base degli indici di invecchiamento e comorbidità, come detto sopra (HCT-CI), per non ridurre eccessivamente il potenziale curativo del trapianto. Questo studio si propone di applicare marcatori innovativi di età biologica per la valutazione dei pazienti SCT. La valutazione dell'età biologica è un'area di ricerca in rapida espansione che ha prodotto risultati molto promettenti. L'età biologica è un indice composto da marcatori molecolari (come la metilazione del DNA delle cellule ematiche nucleate o il livello di glicani associati alle proteine ​​circolanti); è fortemente correlata all'età anagrafica, ma è in grado di esprimere la velocità di invecchiamento del singolo soggetto e di conseguenza è in grado di evidenziare i rischi per la salute legati all'invecchiamento, con maggiore enfasi rispetto all'età anagrafica. La recente letteratura indica chiaramente che il DNA è presente anche nella frazione non cellulare, sotto forma di DNA libero che è in gran parte contenuto nel compartimento delle nanovescicole. In particolare, è interessante studiare se il DNA delle nanovescicole può fornire dati utili sull'epigenoma e verificare come l'epigenoma sia legato alla presenza di DNA esogeno, cioè il microbioma. Questa entità comprende tutte le specie batteriche e virali che coesistono con ogni essere umano, per lo più localizzati nel tratto gastrointestinale, e che sono sempre più determinanti per comprendere la patogenesi delle malattie infiammatorie e/o metaboliche, nonché le basi biologiche dell'invecchiamento. A questo proposito, la letteratura recente mostra una stretta relazione tra GVHD, viroma e microbioma intestinale. L'epigenetica non si occupa specificatamente della modificazione della sequenza del DNA del soggetto ma di tutti i processi regolatori che influenzano l'espressione genica. In particolare, la metilazione è una modifica epigenetica del DNA. Pertanto, gli studi epigenetici differiscono dagli studi genetici classici in cui viene effettuata l'analisi dell'esatta sequenza del DNA dei soggetti. In questo protocollo, i ricercatori faranno riferimento allo "studio del DNA" come allo studio delle sue modificazioni nello stato di metilazione e non nella sua sequenza.

Obiettivo primario dello studio:

- Studio del DNA in campioni di pazienti sottoposti a trapianto allogenico di cellule staminali emopoietiche. In particolare, il DNA sarà estratto dai leucociti e dalle nanovescicole extracellulari plasmatiche. Il DNA sarà valutato per l'entità della metilazione, che sarà anche in relazione con il DNA esogeno circolante (cioè il microbioma).

Obiettivi secondari:

• Studio del DNA in campioni di urine e feci degli stessi soggetti per descrivere ulteriori elementi del microbioma sistemico - vale a dire il viroma urinario e il microbioma intestinale-.
• Correlazione dell'epigenoma circolante e del microbioma sistemico con esiti clinici (sopravvivenza globale, GVHD, incidenza di infezioni) e indice di comorbilità (HCT-CI).

Criteri di esclusione:

- Assenza di consenso informato firmato.

Non viene fornito alcun trattamento; i pazienti saranno trattati e seguiti secondo la normale pratica clinica e secondo le linee guida internazionali.

Le visite e le valutazioni sono quelle di routine e non verranno modificate. I campioni di diversi materiali biologici saranno prelevati all'inizio del recupero, al giorno -1, +1, e dopo 1, 3, 6, 9, 12 mesi dopo il trapianto. Dopo la dimissione, tutti i pazienti saranno seguiti come di consueto dal Day Hospital dell'Unità Trapianti dell'Istituto di Ematologia, dove proseguirà la raccolta prospettica dei campioni in orari definiti.

L'obiettivo primario dello studio è descrittivo. La valutazione delle principali variabili cliniche viene effettuata con analisi descrittive (media, mediana, range, ecc.). L'analisi di sopravvivenza sarà eseguita secondo la metodologia Kaplan-Meier per i dati censurati. L'analisi di regressione per i dati censurati verrà eseguita utilizzando i modelli di rischio proporzionale di Cox.

La metilazione del DNA è espressa in termini di variabili continue, come percentuale di metilazione dei diversi loci genici analizzati. L'analisi dei dati di metilazione sarà eseguita attraverso una pipeline di algoritmi sviluppati dai proponenti. I dati viromici sono variabili nominali (presenza/assenza di specie virali).

Lo studio è di natura esplorativa e prevede l'arruolamento di 50 pazienti.