FISH nella diagnosi di stenosi biliare

La gestione delle stenosi biliari dipende dalla loro corretta valutazione preoperatoria che rimane impegnativa. Le stenosi biliari hanno varie eziologie (traumatiche, infiammatorie, tumorali, ischemiche, ecc.), che devono necessariamente essere conosciute per il corretto approccio terapeutico. Nonostante le moltitudini emergenti di nuove opportunità diagnostiche, c'è ancora un gran numero di stenosi biliari mal diagnosticate con un profondo impatto negativo sull'esito dei pazienti. Il dilemma che esiste è come bilanciare il rischio di perdere la possibilità di un intervento chirurgico curativo per alcune neoplasie e impedire ad alcuni pazienti di sottoporsi a interventi chirurgici non necessari per eziologie benigne e non perdere tempo. Diversi metodi di campionamento convenzionali (come Brush-cytology, biopsie con forcipe durante ERCP, agoaspirato endoscopico guidato-EUS-FNA) hanno una sensibilità relativamente bassa. In tali casi, la colangioscopia orale dimostra un'accuratezza diagnostica del 90%. Questo metodo rimane dipendente dall'esperto, costoso e può portare a complicanze della colangite nel 3-5% dei casi. Sono necessarie tecniche o altri metodi meno complicati e che migliorino la diagnosi preoperatoria delle stenosi biliari. È stato dimostrato che l'ibridazione fluorescente in situ (FISH) migliora la resa diagnostica della citologia di routine.

Questo studio dimostrerà la fattibilità e il ruolo clinico della FISH nella diagnosi delle stenosi biliari e valuterà l'impatto della FISH sulla gestione dei pazienti con stenosi biliari.

FISH (Fluorecent In Situ Hybridization) è un metodo di citogenetica molecolare che consente di rilevare sonde di DNA/RNA o oligonucleotidi marcate in modo fluorescente ibridate in metafase/interfase. Utilizza sonde per legarsi a specifiche sequenze di DNA/RNA. Ciò consente il rilevamento dell'aneuploidia per i cromosomi 3, 7, 17 e la perdita del 9p21 in pazienti con sospetta stenosi biliare maligna.

Sono stati utilizzati diversi metodi per prelevare campioni dal sito della stenosi. Citologia a pennello e biopsie con forcipe endocanale durante ERCP e FNA (aspirazione con ago sottile) durante EUS (endosonografia). Queste tecniche di campionamento hanno specificità e sensibilità relativamente basse. Motivo per cui combineremo la FISH con i metodi di campionamento per massimizzare la nostra possibilità di determinare precocemente l'eziologia della stenosi ed evitare perdite di tempo e colangioscopia non necessaria. In questo studio, la positività di FISH per i cromosomi 3,7,17 ​​è definita dalla presenza di polisomia di questi cromosomi e la positività di FISH per la regione cromosomica definita da una presenza di delezione eterozigote o omozigote per 9p21. La polisomia è definita da un guadagno di 2 o più cromosomi in 4 cellule. Per la regione cromosomica, la delezione o la perdita di 9p21 deve essere osservata in 12 cellule.

Metodi:

• I campioni di tessuto ottenuti tramite citologia con pennello, biopsia con forcipe o aspirazione con ago sottile durante ERCP o endosonografia (EUS) sono stati esaminati mediante metodi di citologia o istologia (RC) di routine.
• Inoltre, è stata eseguita la FISH utilizzando sonde polinucleotidiche a base fluorescente mirate ai cromosomi 3, 7, 17 e al locus 9p21 (ZytoVysion®).

Il successo (positività) è definito dalla presenza di polisomia per i cromosomi 3, 7, 17 e/o dalla presenza di delezione o perdita della regione cromosomica 9p21 in pazienti con sospetta stenosi biliare maligna.

Il gold standard per la diagnosi finale dovrebbe essere l'istologia della resezione chirurgica. Nei pazienti senza intervento chirurgico, un follow-up di 12 mesi sarà considerato adeguato per escludere o confermare l'eziologia maligna delle striture.