FISH no diagnóstico de estenose biliar

O manejo das estenoses biliares depende de sua correta avaliação pré-operatória, que permanece desafiadora. As estenoses biliares têm várias etiologias (traumáticas, inflamatórias, tumorais, isquêmicas etc), que necessariamente precisam ser conhecidas para a correta abordagem terapêutica. Apesar da multiplicidade emergente de novas oportunidades diagnósticas, ainda há um grande número de estenoses biliares mal diagnosticadas com um profundo impacto negativo na evolução dos pacientes. O dilema que existe é como equilibrar o risco de perder a chance de cirurgia curativa para alguma malignidade e evitar que alguns pacientes façam cirurgias desnecessárias para etiologias benignas e não percam tempo. Diferentes métodos convencionais de amostragem (como Brush-cytology, biópsias de fórceps durante CPRE, aspiração por agulha fina guiada por endoscopia-EUS-FNA) têm sensibilidade relativamente baixa. Nesses casos, a colangioscopia peroral comprova acurácia diagnóstica de 90%. Este método permanece dependente do especialista, caro e pode resultar em complicações de colangite em 3-5% dos casos. São necessárias técnicas ou outros métodos menos complicados e que melhorem o diagnóstico pré-operatório das estenoses biliares. A hibridação fluorescente in situ (FISH) demonstrou melhorar o rendimento diagnóstico da citologia de rotina.

Este estudo provará a viabilidade e o lugar clínico da FISH no diagnóstico de estenoses biliares e avaliará o impacto da FISH no manejo de pacientes com estenoses biliares.

FISH (Fluorecent In Situ Hybridization) é um método citogenético molecular, que permite a detecção de sondas de DNA/RNA ou oligonucleotídeos marcadas com fluorescência hibridizadas para metáfase/interfase. Ele usa sondas para se ligar a sequências específicas de DNA/RNA. Isso permite a detecção de aneuploidia para os cromossomos 3, 7, 17 e perda do 9p21 em pacientes com suspeita de estenoses biliares malignas.

Diferentes métodos foram usados ​​para colher amostras do local da estenose. Escova-citologia e biópsias de fórceps endocanal durante CPRE e FNA (aspiração por agulha fina) durante EUS (endossonografia). Essas técnicas de amostragem têm especificidade e sensibilidade relativamente baixas. Razão pela qual combinaremos o FISH com os métodos de amostragem para maximizar nossa chance de determinar precocemente a etiologia da estenose e evitar perda de tempo e colangioscopia desnecessária. Neste estudo, a positividade de FISH para os cromossomos 3,7,17 ​​é definida pela presença de polissomia desses cromossomos e a positividade de FISH para região cromossômica definida pela presença de deleção heterozigótica ou deleção homozigótica para 9p21. A polissomia é definida por um ganho de 2 ou mais cromossomos em 4 células. Para a região cromossômica, a deleção ou perda de 9p21 deve ser observada em 12 células.

Métodos:

• Amostras de tecido obtidas por meio de citologia com escova, biópsia com fórceps ou aspiração com agulha fina durante CPRE ou endossonografia (EUS) foram examinadas por métodos de citologia ou histologia (RC) de rotina.
• Além disso, FISH usando sondas polinucleotídicas baseadas em fluorescência direcionadas aos cromossomos 3, 7, 17 e locus 9p21 foi realizada (ZytoVysion®).

O sucesso (positividade) é definido pela presença de polissomia dos cromossomos 3, 7, 17 e/ou presença de deleção ou perda da região cromossômica 9p21 em pacientes com suspeita de estenoses biliares malignas.

O padrão ouro para o diagnóstico final deve ser a histologia da ressecção cirúrgica. Em pacientes sem cirurgia, um acompanhamento de 12 meses será considerado adequado para excluir ou confirmar a etiologia maligna das estenoses.