Scoperta di biomarcatori del sangue mediante spettroscopia Raman nella dissezione aortica acuta (BBDRSAAD)

Raccolta del campione: La raccolta del sangue (siero e plasma) da tutti i soggetti selezionati al momento del ricovero verrà eseguita seguendo le istruzioni del produttore del tubo di raccolta. Quindi i campioni raccolti saranno conservati a -80° C.

Raccolta dei dati: per l'analisi Raman, 5 μL di ciascun campione saranno colati su un foglio di alluminio per ottenere il Surface Enhanced Raman Scattering (SERS). Gli spettri Raman e SERS saranno acquisiti utilizzando un sistema di spettroscopia micro-Raman confocale WITec Alpha500 (WITec, Germania) con un laser He-Ne da 532 nm (Research Electro-Optics, Inc., USA) come sorgente di eccitazione, che ha offerto una risoluzione di circa 3 cm-1. Lo strumento verrà calibrato prima di ogni analisi utilizzando la banda di riferimento del silicio a 520,7 cm-1. Un obiettivo per microscopio 20 × (NA = 1,25, Zeiss, Germania) è stato utilizzato per l'eccitazione e le misurazioni spettrali. Tutte le informazioni spettrali sono state registrate da una fotocamera retroilluminata con dispositivo ad accoppiamento di carica a esaurimento profondo (ardorTechnology, Regno Unito) funzionante a -60°C con un tempo di acquisizione di 1,5 s per un singolo spettro con un intervallo spettrale di 300-4000 cm-1. Il pacchetto software WITec Project spectral analysis (WITec GmbH, Germania) verrà utilizzato per la progettazione di mappe e l'acquisizione di spettri.

Elaborazione dei dati: tutti gli spettri acquisiti saranno adattati con una linea di base polinomiale di nove ordini e normalizzati per vettore unitario utilizzando il software di analisi spettrale WITec Project dedicato. L'analisi statistica per validare il metodo sarà eseguita utilizzando un approccio di analisi multivariata. Verrà eseguita l'analisi delle componenti principali (PCA) per ridurre le dimensioni dei dati e per evidenziare le principali tendenze. Mann-Whitney sarà eseguito sui punteggi dei PC per verificare le differenze statisticamente rilevanti tra i gruppi analizzati. L'analisi di correlazione e di correlazione parziale sarà effettuata utilizzando il test di Spearman, assumendo come correlazione valida solo i coefficienti con p-value inferiore a 0.05. Successivamente, l'analisi delle componenti principali (PCA) combinata con l'analisi discriminante lineare (LDA), la PCA combinata con la macchina vettoriale di supporto (SVM), l'analisi discriminante dei minimi quadrati parziali (PLS-DA) e così via sono state testate per la valutazione del potere diagnostico. L'analisi statistica sarà eseguita utilizzando il software Origin2018 (OriginLab, USA) e MATLAB R2018b (Mathworks. Inc., Natica, MA, Stati Uniti).