Descubrimiento de biomarcadores sanguíneos por espectroscopia Raman en disección aórtica aguda (BBDRSAAD)

Recolección de muestras: la recolección de sangre (suero y plasma) de todos los sujetos seleccionados al ingreso se realizará siguiendo las instrucciones del fabricante del tubo de recolección. Luego, las muestras recolectadas se almacenarán a -80° C.

Recopilación de datos: para el análisis Raman, se colocarán 5 μL de cada muestra en una lámina de aluminio para lograr la dispersión Raman mejorada en la superficie (SERS). Los espectros Raman y SERS se adquirirán utilizando un sistema de espectroscopia micro-Raman confocal WITec Alpha500 (WITec, Alemania) con un láser He-Ne de 532 nm (Research Electro-Optics, Inc., EE. UU.) como fuente de excitación, que ofreció una resolución de aproximadamente 3 cm-1. El instrumento será calibrado antes de cada análisis utilizando la banda de referencia de silicio a 520,7 cm-1. Se utilizó un objetivo de microscopio de 20x (NA = 1,25, Zeiss, Alemania) para la excitación y las mediciones espectrales. Toda la información espectral se registró con una cámara de dispositivo acoplado de carga de agotamiento profundo retroiluminada (ardorTechnology, Reino Unido) que trabajaba a -60 °C con un tiempo de adquisición de 1,5 s para un solo espectro con un rango espectral de 300-4000 cm-1. El paquete de software de análisis espectral WITec Project (WITec GmbH, Alemania) se utilizará para el diseño de mapas y la adquisición de espectros.

Procesamiento de datos: todos los espectros adquiridos se ajustarán a una línea de base polinomial de nueve órdenes y se normalizarán por vector unitario utilizando el software de análisis espectral dedicado WITec Project. El análisis estadístico para validar el método se realizará utilizando un enfoque de análisis multivariado. Se realizará un análisis de componentes principales (PCA) para reducir las dimensiones de los datos y evidenciar las principales tendencias. Mann-Whitney se realizará en puntajes de PC para verificar las diferencias estadísticamente relevantes entre los grupos analizados. El análisis de correlación y correlación parcial se realizará mediante la prueba de Spearman, asumiendo como correlación válida únicamente los coeficientes con un valor de p inferior a 0,05. Posteriormente, se probaron el análisis de componentes principales (PCA) combinado con el análisis discriminante lineal (LDA), el PCA combinado con la máquina de vectores de soporte (SVM), el análisis discriminante de mínimos cuadrados parciales (PLS-DA), etc. para evaluar el poder de diagnóstico. El análisis estadístico se realizará utilizando Origin2018 (OriginLab, EE. UU.) y el software MATLAB R2018b (Mathworks. Inc., Natica, MA, EE. UU.).