Espressione di neuropeptidi durante il ciclo ovarico e in pazienti con PCOS (PCO-NP)

Questo progetto si propone di indagare i meccanismi neurosensoriali alla base di uno dei disturbi più comuni legati alla follicologenesi, come la PCOS. Lo studio si propone di caratterizzare la PCOS in termini di espressione dei neuropeptidi e di effettuare il confronto tra donne con e senza PCOS, andando ad analizzare campioni di sangue venoso prelevato durante le tre fasi del ciclo ovarico e liquido follicolare, prelevato durante la fase ovulatoria nell'ambito del prelievo degli ovociti. Nello specifico verrà valutata l'espressione di neuropeptidi quali CGRP, SP, VIP ed encefaline nelle tre fasi del ciclo ovarico (fase follicolare, fase ovulatoria e fase luteale) nei tre gruppi di donne considerati.

Disegno dello studio:

Lo studio arruolerà 45 pazienti totali, riferite al Centro PMA, suddivise in 3 gruppi di 15 pazienti ciascuno: Gruppo 1 (controllo) donne con ciclo ovarico regolare; Gruppo 2 - donne non PCOS sottoposte a stimolazione ovarica e trattamento ICSI; Gruppo 3- donne con PCOS sottoposte a stimolazione ovarica e trattamento ICSI.

Lo studio avrà una durata complessiva di 24 mesi così suddivisi:

• Monitoraggio pre-fase e arruolamento dei soggetti (20 mesi).

  • Il gruppo 1 seguirà il protocollo di monitoraggio ovarico, durante il quale verranno prelevati campioni di sangue nelle tre fasi del ciclo ovarico.
  • I gruppi 2 e 3 saranno sottoposti a stimolazione ovarica e trattamento ICSI, prelevati con campioni di sangue e liquido follicolare nelle fasi del ciclo specificate.
• Esecuzione di analisi chimico/biochimiche eseguite presso il laboratorio di elettrofisiologia dell'Università degli Studi di Perugia (2 mesi).
• Esecuzione di test statistici ed elaborazione dei dati ottenuti (2 mesi)

Ai soggetti verrà somministrato un prelievo di sangue venoso da 4 ml secondo la normale pratica clinica per eseguire il dosaggio dell'ormone durante il monitoraggio del ciclo ovarico.

Non sono previsti test diagnostici al di fuori della pratica clinica di routine e ai pazienti non sarà richiesto di recarsi al Centro PMA per visite aggiuntive oltre a quelle richieste dalla normale pratica clinica.

Soggetti e Luogo di Reclutamento: Verranno reclutate 45 pazienti: 15 donne con diagnosi di PCOS e 30 donne non PCOS presso il Centro di Riproduzione Medicalmente Assistita dell'Azienda Ospedaliera di Perugia (Responsabile: Prof. S. Gerli).

MATERIALI E METODI:

GRUPPO 1: Le pazienti, come da normale pratica clinica, verranno sottoposte a tre prelievi nelle fasi follicolare, ovulatoria e luteale.

GRUPPO 2 e 3: le pazienti saranno sottoposte a trattamento di stimolazione ovarica con gonadotropine e prelievo di ovociti. Come parte di questo processo, come da pratica clinica, verrà eseguito il prelievo di sangue e liquido follicolare.

Metodi Raccolta materiale biologico: Durante il monitoraggio del ciclo ovarico, verrà eseguito un prelievo di sangue venoso al mattino dopo almeno 10 ore di digiuno nelle pazienti durante le fasi descritte nella Tabella 1. Verrà prelevato anche un campione di liquido follicolare durante il prelievo degli ovociti (gruppo 2 e 3). Nello specifico, un'aliquota di campione di sangue, il cui liquido follicolare sarà valutato per saggiare il livello di neuropeptidi (CGRP, SP, VIP ed encefaline). Il livello di CGRP sarà misurato utilizzando un kit immunoenzimatico privo di estrazione (Peninsula Laboratories LLC, CA, USA) seguendo il protocollo del produttore. Per la misurazione quantitativa della sostanza umana P verrà utilizzato il kit ELISA per l'analisi enzimatica della sostanza umana P (ELK1453-96T - Twin Elix srl). Per il VIP verrà utilizzato il kit ELISA per Human VIP (ELK1453-96T - Twin Elix srl) e per il dosaggio delle encefaline verrà utilizzato il kit ELISA per Human Enkephalins (ELK5246-96T - Twin Elix srl). I saggi dei neuropeptidi saranno condotti presso il Laboratorio di Fisiologia del Dipartimento di Chimica, Biologia e Biotecnologie dell'Università di Perugia, in collaborazione con il Prof. Fioretti.

I sieri saranno inoltre analizzati per glucosio a digiuno, trigliceridi (TG), colesterolo totale (TC), colesterolo lipoproteico ad alta densità (HDL), insulina, deidroepiandrosterone solfato (DHEAS), globulina legante gli ormoni sessuali (SHBG), progesterone, estradiolo, ormone follicolo-stimolante (FSH), LH e testosterone totale. Saranno misurate anche le concentrazioni sieriche di glucosio (esochinasi), colesterolo totale (CHOD-PAP) e trigliceridi (GPO-PAP) utilizzando metodi enzimatici standard (Roche Diagnostics, IN, USA) con un analizzatore completamente automatizzato (Roche Modular PE, Roche Diagnostics , NEGLI USA).