Microbioma gastrointestinale e risposta all'immunoterapia nel melanoma maligno metastatico

Questo studio clinico prospettico, non randomizzato valuta il valore prognostico e predittivo del microbioma gastrointestinale in pazienti con melanoma maligno metastatico trattati con inibitori dei checkpoint immunitari (inibitori PD-1 e inibitori CTLA-4) in prima linea.
Sebbene l'immunoterapia abbia migliorato la sopravvivenza nel melanoma metastatico, gli esiti clinici rimangono eterogenei e una proporzione sostanziale di pazienti sperimenta eventi avversi correlati all'immunità, pseudoprogressione o iperprogressione.
L'identificazione di biomarcatori che predicono la risposta e la tossicità rimane clinicamente importante.

Il tratto gastrointestinale contiene un'alta concentrazione di microbi e tessuto linfoide, e il sistema immunitario e il microbioma esistono in stretta interazione.
Il microbioma gastrointestinale influenza la risposta immunitaria sistemica attraverso la produzione di citochine e la regolazione dell'attività delle cellule T.
Studi precedenti suggeriscono che la composizione e la diversità del microbioma possono essere associate alla sopravvivenza globale (OS), alla sopravvivenza libera da progressione (PFS) e alla risposta al trattamento in pazienti che ricevono inibitori dei checkpoint immunitari.
La disbiosi indotta da antibiotici è stata associata a ridotta efficacia dell'immunoterapia, e il trapianto di microbiota fecale ha mostrato potenziale nel superare la resistenza agli inibitori PD-1.

L'obiettivo primario di questo studio è determinare se la composizione predominante del microbioma gastrointestinale sia associata alla risposta obiettiva agli inibitori PD-1 e CTLA-4 in pazienti con melanoma maligno metastatico, valutata secondo i criteri iRECIST.
L'ipotesi primaria è che un profilo specifico del microbioma sia associato alla risposta al trattamento e alla sopravvivenza libera da progressione (PFS).

Gli obiettivi secondari includono la valutazione dell'associazione tra composizione del microbioma ed eventi avversi correlati all'immunità, progressione della malattia durante il trattamento e popolazioni di cellule immunitarie nel sangue periferico (CD3+, CD4+, CD8+, rapporto CD4/CD8 e macrofagi).

Sono stati arruolati un totale di 132 pazienti trattati con inibitori dei checkpoint immunitari in prima linea presso l'Istituto di Oncologia di Lubiana tra marzo 2022 e marzo 2024.
I dati clinici sono stati raccolti in forma anonima e includono sesso, età, data di diagnosi, performance status all'inizio del trattamento, parametri di laboratorio (inclusi LDH e S100), localizzazione del melanoma, stato BRAF, durata del trattamento, risposta radiologica ed eventi avversi correlati all'immunità.

Oltre al trattamento standard, i partecipanti hanno subito la raccolta di campioni biologici specifici dello studio secondo un programma predefinito.
I campioni di feci sono stati raccolti prima dell'inizio del trattamento, alla settimana 12 (±2 settimane) e alla settimana 28 (±2 settimane), in caso di sospetta progressione/iperprogressione e al verificarsi di eventi avversi correlati all'immunità.
Se i partecipanti hanno ricevuto terapia antibiotica, la raccolta delle feci è stata posticipata ed eseguita tre settimane dopo il completamento degli antibiotici.
I campioni sono stati analizzati presso la Facoltà di Biotecnologie dell'Università di Lubiana utilizzando il sequenziamento di ampliconi di 16S rRNA con la tecnologia Illumina 16S/ITS Nextera a due step PCR e MiSeq 2×300.
Le analisi bioinformatiche e statistiche sono state eseguite utilizzando la pipeline UPARSE, i database Silva NR SSU e LTP SSU, il pacchetto software Mothur e il pacchetto R Phyloseq.

I campioni di sangue venoso periferico sono stati raccolti fino a quattro settimane prima dell'inizio del trattamento, alla settimana 12 (±2 settimane) e alla settimana 28 (±2 settimane), in caso di sospetta progressione/iperprogressione e al verificarsi di eventi avversi correlati all'immunità.
Ulteriori campioni di sangue sono stati analizzati presso il Dipartimento di Citologia dell'Istituto di Oncologia di Lubiana utilizzando la citometria a flusso per determinare le popolazioni di cellule immunitarie, inclusi CD3+, CD4+, CD8+, rapporto CD4/CD8 e macrofagi.
I campioni sono stati analizzati utilizzando il software FACSCanto 10 e FACSDiva.

La valutazione radiologica è stata eseguita utilizzando PET/CT o CT tripletta (testa, torace, addome) entro quattro settimane prima dell'inizio del trattamento e alla settimana 12 (±2 settimane) e alla settimana 28 (±2 settimane).
Imaging aggiuntivo è stato eseguito in caso di sospetta progressione o in base al giudizio clinico.
La risposta al trattamento è stata valutata secondo i criteri iRECIST e categorizzata come risposta completa (CR), risposta parziale (PR), malattia stabile (SD) o malattia progressiva (PD).
La pseudoprogressione è stata definita come progressione radiologica temporanea senza deterioramento clinico seguita da successiva riduzione del carico tumorale.