Microbioma Gastrointestinal e Resposta à Imunoterapia no Melanoma Maligno Metastático

Este estudo clínico prospetivo e não randomizado avalia o valor prognóstico e preditivo do microbioma gastrointestinal em doentes com melanoma maligno metastático tratados com inibidores de pontos de controlo imunológico (inibidores de PD-1 e inibidores de CTLA-4) em primeira linha. Embora a imunoterapia tenha melhorado a sobrevivência no melanoma metastático, os resultados clínicos permanecem heterogéneos e uma proporção substancial de doentes experiencia eventos adversos relacionados com o sistema imunitário, pseudoprogressão ou hiperprogressão. A identificação de biomarcadores que prevejam resposta e toxicidade mantém-se clinicamente importante.

O trato gastrointestinal contém uma elevada concentração de microrganismos e tecido linfoide, e o sistema imunitário e o microbioma existem em interação próxima. O microbioma gastrointestinal influencia a resposta imunitária sistémica através da produção de citocinas e da regulação da atividade das células T. Estudos anteriores sugerem que a composição e diversidade do microbioma podem estar associadas à sobrevivência global (OS), sobrevivência livre de progressão (PFS) e resposta ao tratamento em doentes que recebem inibidores de pontos de controlo imunológico. A disbiose induzida por antibióticos tem sido associada à redução da eficácia da imunoterapia, e o transplante de microbiota fecal mostrou potencial na superação da resistência aos inibidores de PD-1.

O objetivo principal deste estudo é determinar se a composição predominante do microbioma gastrointestinal está associada à resposta objetiva aos inibidores de PD-1 e CTLA-4 em doentes com melanoma maligno metastático, avaliada de acordo com os critérios iRECIST. A hipótese principal é que um perfil específico do microbioma está associado à resposta ao tratamento e à sobrevivência livre de progressão (PFS).

Os objetivos secundários incluem a avaliação da associação entre a composição do microbioma e eventos adversos relacionados com o sistema imunitário, progressão da doença durante o tratamento e populações de células imunitárias no sangue periférico (CD3+, CD4+, CD8+, razão CD4/CD8 e macrófagos).

Foram incluídos um total de 132 doentes tratados com inibidores de pontos de controlo imunológico em primeira linha no Instituto de Oncologia de Ljubljana entre março de 2022 e março de 2024. Os dados clínicos foram recolhidos de forma anonimizada e incluem sexo, idade, data de diagnóstico, estado de performance no início do tratamento, parâmetros laboratoriais (incluindo LDH e S100), localização do melanoma, estado BRAF, duração do tratamento, resposta radiológica e eventos adversos relacionados com o sistema imunitário.

Além do tratamento padrão, os participantes realizaram recolha de amostras biológicas específicas do estudo de acordo com um calendário pré-definido. As amostras de fezes foram recolhidas antes do início do tratamento, na semana 12 (+2 semanas) e semana 28 (+2 semanas), em suspeita de progressão/hiperprogressão e na ocorrência de eventos adversos relacionados com o sistema imunitário. Se os participantes receberam terapia antibiótica, a recolha de fezes foi adiada e realizada três semanas após a conclusão dos antibióticos. As amostras foram analisadas na Faculdade de Biotecnologia, Universidade de Ljubljana, utilizando sequenciação por amplicon de 16S rRNA com tecnologia Illumina 16S/ITS Nextera de PCR em duas etapas e MiSeq 2×300. As análises bioinformáticas e estatísticas foram realizadas utilizando a pipeline UPARSE, bases de dados Silva NR SSU e LTP SSU, pacote de software Mothur e o pacote R Phyloseq.

As amostras de sangue venoso periférico foram recolhidas até quatro semanas antes do início do tratamento, na semana 12 (+2 semanas) e semana 28 (+2 semanas), em suspeita de progressão/hiperprogressão e na ocorrência de eventos adversos relacionados com o sistema imunitário. Amostras de sangue adicionais foram analisadas no Departamento de Citologia, Instituto de Oncologia de Ljubljana, utilizando citometria de fluxo para determinar as populações de células imunitárias, incluindo CD3+, CD4+, CD8+, razão CD4/CD8 e macrófagos. As amostras foram analisadas utilizando software FACSCanto 10 e FACSDiva.

A avaliação radiológica foi realizada utilizando PET/TC ou TC triplo (cabeça, tórax, abdómen) até quatro semanas antes do início do tratamento e na semana 12 (+2 semanas) e semana 28 (+2 semanas). Imagiologia adicional foi realizada em suspeita de progressão ou com base em julgamento clínico. A resposta ao tratamento foi avaliada de acordo com os critérios iRECIST e categorizada como resposta completa (CR), resposta parcial (PR), doença estável (SD) ou doença progressiva (PD). Pseudoprogressão foi definida como progressão radiológica temporária sem deterioração clínica, seguida de redução subsequente da carga tumoral.