抗結核治療の個別化: 治療反応の薬理学的決定因子の評価 (PAT)

活動性肺結核と診断された患者を対象に、縦断的観察多施設研究が実施される。

次の変数が記録されます。

• 人口統計学的変数: 年齢、性別、民族、NAT2、SLCO1B1、ABCB1、および VDR の SNP。
• 臨床変数: 体重、身長、腎機能検査、肝機能検査、ビタミン D (25-OH ビタミン D) レベル、アルブミン血症、HIV、HCV の血清学、併存疾患の存在 (例: 糖尿病）、視力検査、神経因性症状の存在。
• 微生物学的変数: 表現型および遺伝子型の薬剤感受性検査結果、喀痰結核菌 DNA (PCR)、顕微鏡検査、培養、液体培養での陽性反応時間 (TTP)、IGRA 検査 (実施された場合)、以前の治療歴、肺病変の位置、肺以外の場所の存在;
• 治療変数: 治療の開始/終了、治療の中断、用量 mg/kg、投与経路。

患者は国際ガイドラインに従って標準抗結核薬（RIF 10 mg/kg、INH 5 mg/kg 最大用量 300 mg、ETB 15-20 mg/kg、PZA 25 mg/kg 最大用量 2000 mg）を固定状態で投与されます。 1日1回。

血漿濃度を測定するために、投与後0、2、4および6時間で4つの血液サンプル(ヘパリンリチウム7mlチューブ)を採取する。 この分析は、抗結核治療の開始から 7 日後と 14 日後に行われます。

薬理遺伝学的分析のために、ベースラインで血液サンプル (EDTA 4 ml チューブ) が収集されます。

喀痰サンプルは、マイコバクテリア培養のためにベースライン、7 日目および 14 日目に収集されます。

神経および肝毒性を調査するために、ベースライン、7 日目および 14 日目に医療訪問と血液サンプル (LFT 用) が行われます。

薬物動態 採取後、サンプルを遠心分離し（3000 rev min-1、4℃で 10 分間）、血漿を 2 つのアリコート（体積 1 mL）に分けて -20℃ で凍結し、検査機関に配送します。イタリア、トリノのトリノ大学アメデオ ディ サヴォイア病院、ASLTO2 の薬物動態学および薬理遺伝学。

4 種類の薬物すべての血漿濃度は、液体クロマトグラフィーとタンデム質量分析法を組み合わせて測定されます (サンプル量が少ないにもかかわらず高感度が可能です)。 収集された濃度時間データは、定常状態での薬物動態特性を特徴付ける非コンパートメント アプローチによって評価されます。 AUC、最大（Cmax）および最小（Cmin）薬物レベル、および血漿排出半減期は、これらの薬物の酵素誘導特性を評価するために使用されます。 薬理ゲノミクス (PG) DNA は、QIamp DNA Mini Kit (Quiagen、Valencia、CA) を使用して全血から抽出されます。 精製および溶出された DNA は、リアルタイム PCR (BIORAD、ミラノ、イタリア) 反応に直接使用されます。 対立遺伝子識別分析は、TaqMan アッセイ (Applied Biosystems、カリフォルニア州フォスターシティ) を使用して実行されます。

分析された SNP は次のようになります。

ABCB1 3435C>T (rs1045642)、OATP1B1 521T>C (rs4149056)、OATP1B1 85-7793T>C (rs4149032)、PXR 63396C>T (rs2472677)、BsmI G>A (rs1544410)。

および NAT2 G>A (rs1799930)。 乾燥血液スポット (DBS) および乾燥血漿スポット (DPS) DPS 上の血漿濃度を測定する方法は、当研究室によって開発および検証されます。 この研究では、DPS の評価のための血液サンプルは当研究所の被験者からのみ採取されます。 遠心分離（3000 rev min-1、4℃で10分間）後、100μlの血漿を各ガラスフィルター（Laboratori Biomicron srl、イタリアから購入）上にスポットし、薬物動態（PK）分析に使用します。 残りの血漿は分析の対照として使用されます。

薬理遺伝学的（PG）分析のために、静脈血サンプルをすべての被験者から採取し、全血（スポット当たり50μl）をDBS Whatman 903プロテインセーバーカード（VWR International、ミラノ、イタリア）上にスポットする。

DBS は、乾燥剤の入ったフォイルバッグ (フォイルバッグおよび乾燥剤パック、Laboratori Biomicron srl、イタリアから購入) に挿入され、室温で保管されます。 最長 30 日後、サンプルはイタリア、トリノの ASLTO2、トリノ大学アメデオ ディ サヴォイア病院の薬物動態学および薬理遺伝学研究室に配送されます。 分析が行われるまで（収集から 3 か月以内）、-20°C で保管されます。

陽性までの時間 ベースライン、7 日および 14 日での喀痰培養の陽性までの時間は、BACTEC MGIT System (Mycobacteria Growth Indication Tube) 960 に統合されたソフトウェア BD Epicenter を使用して計算されます。 デフォルトの時間は 42 日です。