AntiTB-hoidon personointi: hoitovasteen farmakologisten tekijöiden arviointi (PAT)

Potilaille, joilla on diagnosoitu aktiivinen keuhkotuberkuloosi, tehdään pitkittäinen havainnollinen monikeskustutkimus.

Seuraavat muuttujat tallennetaan:

• demografiset muuttujat: ikä, sukupuoli, etnisyys, SNP:t NAT2:lle, SLCO1B1:lle, ABCB1:lle ja VDR:lle;
• kliiniset muuttujat: paino, pituus, munuaisten toimintakokeet, maksan toimintakokeet, D-vitamiinin (25-OH-D-vitamiini) taso, albuminemia, serologia HIV:lle, HCV, rinnakkaissairauksien esiintyminen (esim. diabetes mellitus), näöntarkkuustesti, neuropaattisten oireiden esiintyminen;
• mikrobiologiset muuttujat: fenotyyppiset ja genotyyppiset lääkeherkkyystestien tulokset, ysköksen Mycobacterium tuberculosis DNA (PCR), mikroskopia, viljely, aika positiivisuuteen (TTP) nesteviljelmässä, IGRA-testi (jos tehty), aiempien hoitojen historia, keuhkovaurioiden sijainti, keuhkojen ulkopuolisten paikkojen esiintyminen;
• terapeuttiset muuttujat: hoidon aloitus/loppu, hoidon keskeytykset, annos mg/kg, antoreitti.

Potilaat saavat kansainvälisten ohjeiden mukaisia ​​normaaleja tuberkuloosilääkkeitä (RIF 10 mg/kg, INH 5 mg/kg maksimiannos 300 mg, ETB 15-20 mg/kg, PZA 25 mg/kg maksimiannos 2000 mg) kiinnitystilassa, kerran päivässä.

Plasman pitoisuuksien mittaamiseksi otetaan neljä verinäytettä (7 ml:n litiumhepariiniputket) 0, 2, 4 ja 6 tunnin kuluttua annoksesta. Tämä analyysi tehdään 7 ja 14 päivää tuberkuloosin vastaisen hoidon aloittamisen jälkeen.

Farmakogeneettistä analyysiä varten otetaan verinäyte (EDTA 4 ml putki) lähtötasolla.

Yskösnäytteet kerätään lähtötilanteessa, 7 ja 14 päivän kuluttua mykobakteeriviljelyä varten.

Lääkärikäynnit ja verinäytteet (LFT:t) suoritetaan lähtötilanteessa, 7 ja 14 päivän kuluttua neuro- ja hepatotoksisuuden tutkimiseksi.

Farmakokinetiikka Keräyksen jälkeen näytteet sentrifugoidaan (3000 kierrosta min-1 4 °C:ssa 10 minuutin ajan) ja plasma jäädytetään -20 °C:ssa kahdessa erässä (1 ml tilavuus) ja toimitetaan laboratorioon Torinon yliopiston Amedeo di Savoia -sairaalan farmakokinetiikka ja farmakogenetiikka, ASLTO2, Torino, Italia.

Kaikkien neljän lääkkeen plasmapitoisuudet mitataan käyttämällä nestekromatografiaa yhdistettynä tandemmassaspektroskopiaan (mahdollistaa korkean herkkyyden pienistä näytetilavuuksista huolimatta). Kerätyt pitoisuus-aikatiedot arvioidaan ei-osastoittaisella lähestymistavalla farmakokineettisten ominaisuuksien karakterisoimiseksi vakaassa tilassa. Näiden lääkkeiden entsymaattisten induktioominaisuuksien arvioinnissa käytetään AUC-arvoa, enimmäis- (Cmax) ja minimi (Cmin) lääketasoja sekä plasman eliminaation puoliintumisaikaa. Farmakogenomiikan (PG) DNA uutetaan kokoverestä käyttämällä QIamp DNA Mini Kitiä (Quiagen, Valencia, CA). Puhdistettua ja eluoitua DNA:ta käytetään suoraan reaaliaikaiseen PCR-reaktioon (BIORAD, Milano, Italia). Alleelinen erotteluanalyysi suoritetaan käyttämällä TaqMan-määrityksiä (Applied Biosystems, Foster City, CA).

Analysoidut SNP:t ovat:

ABCB1 3435C>T (rs1045642), OATP1B1 521T>C (rs4149056) ja OATP1B1 85-7793T>C (rs4149032), PXR 63396C>T (rs2472677), GA45m (rs2472677>As).

ja NAT2 G>A (rs1799930). Kuivatut veripisteet (DBS:t) ja kuivatut plasmatäplät (DPS:t) Laboratoriomme kehittää ja validoi menetelmän DPS:n plasmapitoisuuksien määrittämiseksi. Tutkimuksessa verinäytteet DPS:iden arvioimiseksi otetaan vain instituuttimme koehenkilöiltä. Sentrifugoinnin (3000 kierrosta min-1 4 °C:ssa 10 minuutin ajan) jälkeen jokaiselle lasisuodattimelle (ostettu Laboratori Biomicron srl:ltä, Italiasta) laitetaan 100 μl plasmaa ja käytetään farmakokineettiseen (PK) analyysiin. Jäljellä olevaa plasmaa käytetään kontrollina analyysissä.

Farmakogeneettistä (PG) analyysiä varten kaikilta koehenkilöiltä otetaan laskimoverinäytteet ja kokoveri (50 µl per kohta) havaitaan DBS Whatman 903 -proteiininsäästökorteilla (VWR International, Milano, Italia).

DBS asetetaan kalvopussiin, jossa on kuivausainetta (Foil Bag and Desiccant Packs, ostettu Laboratori Biomicron srl:ltä, Italia) ja säilytetään sitten huoneenlämmössä. Enintään 30 päivän kuluttua näytteet toimitetaan Torinon yliopiston Amedeo di Savoia -sairaalan farmakokinetiikan ja farmakogenetiikan laboratorioon, ASLTO2, Torino, Italia. Niitä säilytetään -20°C:ssa analyysiin asti (3 kuukauden sisällä keräämisestä).

Aika positiivisuuteen Aika positiivisuuteen yskösviljelmillä lähtötilanteessa, 7 ja 14 päivää, lasketaan käyttämällä BD Epicenter -ohjelmistoa, joka on integroitu BACTEC MGIT System (Mycobacteria Growth Indication Tube) 960:een. Oletusaika on 42 päivää.