変形性関節症感染症における分子微生物学 (MOLOS)

背景: 骨関節感染症は、関係する微生物に適応した抗菌治療を必要とする、痛みを伴う病気です。 微生物学的培養は現在、病原性細菌の同定の基準と見なされており、ほとんどの場合、診断を確立するには微生物学的培養で十分であると思われます。 ただし、これらの文化の感度は非常に可変であり、臨床サンプルが採取された状況と関与する病原体の両方に依存します。 さらに、以前の実験データは、分子的手法が従来の培養では見逃されていた診断を生み出す可能性があることを示しています。 主な目的: この研究の目的は、通常、骨や関節の感染症の診断を確立するために使用される臨床的、放射線学的、および生物学的な議論の蓄積を症例の定義のために考慮することにより、微生物学的培養および分子的方法の診断性能を評価することです。 2 つの方法の不一致は、骨関節感染症の専門家グループ (細菌学者、放射線科医、外科医、解剖病理学者、およびリウマチ専門医によって構成される) によって二次的に分類されます。副次的な目的: 2 つの方法で得られた結果の遅延の定量化 研究デザイン: · 骨関節感染症に特化した 1 つのセンター · 前向き観察研究 · 2 つの診断方法: 培養法と分子法 · 専門家グループ 含まれる患者と数患者: 194 人の症例と 90 人の対照で構成される合計 284 人の患者 含まれる患者 (n=194) はすべて、椎間板炎、敗血症性関節炎、および包含基準によって定義される人工関節感染症を含む変形性関節症の疑いのある診断を受けます。含まれる患者の結果が比較されます。期間のプロトコル: 各患者の研究期間は 6 か月です。プロトコル期間は 2 年間計画されています。手順: すべてのサンプルは同じ手順で処理されます。生検、..) 手術中、ベッドサイドでの穿刺吸引、またはガイド付き超音波検査のいずれかで回収され、すべて無菌状態 (マスク、滅菌手袋、慎重な皮膚の準備とタオル掛け) の下で、無菌チューブに入れて細菌部門に運ばれます。 12 時間以内に基質を追加できます。 - 細菌学的手順は、骨関節感染症に適用されるガイドラインに従って実行されます · 液体サンプル: 赤血球および白血球数、多形核パーセンテージ · 固体標本: 機械装置を使用して粉砕 · グラムおよびオーラミン染色 · コロンビア羊血液寒天培地で 37°C で培養(好気的および嫌気的に 5 日間)、IsoVitaleX を添加したチョコレート寒天 (5% CO2 で 5 日間)、ブレイン ハート インフュージョン ブロス (嫌気的に 15 日間、同じ寒天培地で 10 日後に継代培養を行った。曇り）。・ マイコバクテリア培養 : Lowenstein-Jensen および COLETSOS 培地、MGIT で 3 か月間培養。 分子手順 · PCR 前後の DNA 操作: 外来 DNA によるサンプルの汚染を防ぐために、別々のピペッティング デバイスを備えた別々の部屋で。 · PCR 前のステップで使用される機器: DNA を含まず、UV 照射済み。 ・ブームの方法に基づくＤＮＡ抽出：ＱＩＡＧＥＮキットおよびＥＺ１ ＢｉｏＲｏｂｏｔ ・広範囲の１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子増幅 ・アンプリコン：ＡＢＩＰＲＩＳＭ ３１００アナライザー（アプライドバイオシステムズ、クールタブーフ、フランス）で両方向に配列決定。 · 1 つのサンプルでの複数の配列のクローニング実験 · 配列の分析: 国立生物工学情報センターの Web サイトから BLASTN プログラムを使用した GenBank。 内部コントロール PCR: b-アクチン遺伝子 · リアルタイム PCR: マイコバクテリアおよび淋菌性関節炎の検出 - 潜在的な影響: 現在までに発表された研究の大半と同様に、分子法を別の診断法と比較することもできたはずです。 （文化、組織学）。 しかし、現時点ではゴールド スタンダードはなく、骨関節感染症の診断は一般的に議論の蓄積に基づいています。 専門家グループのルールは、含まれる各患者が「感染」するかどうかを、可能な限り間違いなく決定することです。 この方法論は、日常の臨床現場に近く、患者を治療している医師に信頼されています。 この研究が、私たちのグループにおける従来の方法に対する分子生物学の利点を示している場合、骨関節感染症の診断図について議論することは正当化されるでしょう.