Molekylær mikrobiologi i osteo-arthritis infektion (MOLOS)

Baggrund: Slidgigtinfektioner er smertefulde og invaliderende sygdomme, der kræver antimikrobiel behandling tilpasset de implicerede mikroorganismer. Mikrobiologiske kulturer betragtes i dag som reference til identifikation af patogene bakterier, og det ser ud til, at de mikrobiologiske kulturer i de fleste tilfælde er tilstrækkelige til at stille diagnosen. Imidlertid er følsomheden af ​​disse kulturer meget varierende og afhænger både af konteksten, hvori kliniske prøver tages, og af det involverede patogen. Derudover viser tidligere eksperimentelle data, at molekylære metoder kunne producere en diagnose, der mangler ved konventionelle kulturer. Hovedformål: Formålet med undersøgelsen er at evaluere den diagnostiske ydeevne af mikrobiologiske kulturer og molekylær metode ved til definition af tilfælde at overveje en ophobning af kliniske, radiologiske og biologiske argumenter, der sædvanligvis anvendes til at etablere diagnosen af ​​knogle- og ledinfektioner. Uoverensstemmelsen mellem de to metoder vil blive sekundært klassificeret af en ekspertgruppe for osteoartikulær infektion (sammensat af en bakteriolog, en radiolog, en kirurg, en anatomi-patolog og en reumatolog). Testet hypotese: Interesse for molekylære metoder til diagnosticering af osteoartikulær infektioner.Sekundært mål: Kvantificering af forsinkelsen af ​​resultaterne opnået ved de to metoder Studiedesign: · Et center specialiseret i osteoartikulære infektioner· Observationel prospektiv undersøgelse· To diagnosemetoder: kulturer og molekylære metoder· En ekspertgruppe Inkluderede patienter og antal af patienter: I alt 284 patienter bestående af 194 tilfælde og 90 kontroller. Inkluderede patienter (n=194) vil alle have en mistænkt diagnose af osteoartikulære infektioner, herunder discitis, septisk arthritis og proteseledsinfektion defineret af inklusionskriterier. Resultaterne af de inkluderede patienter vil blive sammenlignet til dem opnået fra gruppen af ​​kontrolpatienter (n=90). Varighedsprotokol: Undersøgelsens varighed er 6 måneder for hver patientProtokolvarigheden er planlagt til 2 årProcedurer:Alle prøver vil blive behandlet med samme procedure - Prøver (synovialvæsker, biopsier, ..) vil blive udvundet enten under operationen, ved punkteringsaspiration ved sengekanten eller ved guidet ultralyd, alt under sterile forhold (maske, sterile handsker, forsigtig hudforberedelse og håndklæde) og transporteret til Bakteriologisk afdeling i sterile rør uden ekstra substrat på mindre end 12 timer. - Bakteriologiske procedurer vil blive udført i overensstemmelse med retningslinjerne for osteoartikulær infektion · Væskeprøver: erytrocyt- og leukocyttal, polymorfonukleær procentdel · Faste prøver: knust ved hjælp af et mekanisk apparat · Gram- og auraminfarvning · Kulturer ved 37°C på Columbia fåreblod-agar (aerobt og anaerobt i 5 dage), chokoladeagar suppleret med IsoVitaleX (med 5 % CO2 i 5 dage), hjernehjerteinfusionsbouillon (anaerobt i 15 dage med subkulturer udført efter 10 dage på det samme agarmedie, selvom aspektet ikke var overskyet).· Mycobakteriel kultur: Lowenstein-Jensen og COLETSOS medier, MGIT inkuberet i 3 måneder.- Molekylære procedurer· DNA-manipulationer før og efter PCR: i separate rum med separate pipetteringsanordninger for at forhindre kontaminering af prøver med fremmed DNA. · Udstyr brugt i præ-PCR-trin: DNA-frit og UV-bestrålet. · DNA-ekstraktion baseret på Booms metode: QIAGEN kit og EZ1 BioRobot · Bredvidde 16S rRNA genamplifikation · Amplikoner: sekventeret i begge retninger på en ABIPRISM 3100 analysator (Applied Bio systems, COURTABOEUF, Frankrig). · Kloningseksperimenter for flere sekvenser i én prøve· Analyse af sekvens: GenBank ved hjælp af BLASTN-programmet via webstedet for National Center of Biotechnology Information.· Intern kontrol PCR: b-actin gen· Realtids PCR: til påvisning af mykobakterier og gonokok arthritis- Potentielle implikationer: Vi kunne have valgt, ligesom størstedelen af ​​de hidtil offentliggjorte undersøgelser, at sammenligne vores molekylære metode med en anden diagnosemetode (kultur, histologi). Der er dog ikke i øjeblikket guldstandard, og diagnosticeringen af ​​slidgigtinfektioner hviler generelt på en ophobning af argumenter. Ekspertgruppens regel er at afgøre, med færre mulige fejl, om hver patient inkluderet vil være "inficeret". Denne metode er tæt på den daglige kliniske virkelighed og stoler på den læge, der behandlede patienten. Hvis undersøgelsen viser en fordel ved molekylærbiologien i forhold til klassiske metoder i vores grupper, ville det være berettiget at diskutere diagnosediagrammet for osteoartikulære infektioner.