골관절염 감염에서의 분자미생물학 (MOLOS)

배경: 골관절염은 관련된 미생물에 적응된 항균 치료가 필요한 고통스럽고 장애가 되는 질병입니다. 미생물 배양은 현재 병원성 박테리아를 식별하기 위한 기준으로 간주되며 대부분의 경우 미생물 배양이 진단을 확립하는 데 충분합니다. 그러나 이러한 배양의 민감도는 매우 다양하며 임상 샘플을 채취한 상황과 관련된 병원체에 따라 다릅니다. 또한, 이전의 실험 데이터는 분자적 방법이 기존 배양에서 누락된 진단을 생성할 수 있음을 보여줍니다. 주요 목적: 이 연구의 목적은 뼈 및 관절 감염의 진단을 확립하는 데 일반적으로 사용되는 임상, 방사선 및 생물학적 인수의 축적을 사례 정의에 대해 고려하여 미생물 배양 및 분자 방법의 진단 성능을 평가하는 것입니다. 두 방법의 불일치는 골관절염 전문가 그룹(세균학자, 방사선과, 외과의, 해부학-병리학자 및 류마티스 전문의로 구성)에 의해 이차적으로 분류될 것입니다. 검증된 가설: 골관절염 진단을 위한 분자적 방법의 관심 두 번째 목표: 두 가지 방법으로 얻은 결과의 지연 정량화 연구 설계: · 골관절염 전문 센터 한 곳 · 관찰 전향적 연구 · 두 가지 진단 방법: 배양 및 분자 방법 · 전문가 그룹 포함 환자 및 환자 수 환자: 총 284명의 환자(194건, 대조군 90명) 포함된 환자(n=194)는 모두 추간판염, 패혈성 관절염 및 인공관절 감염을 포함하는 골관절염이 의심되는 진단을 받게 됩니다. 포함된 환자의 결과는 비교됩니다. 기간의 프로토콜: 연구 기간은 각 환자에 대해 6개월입니다. 프로토콜 기간은 2년으로 계획됩니다. 절차: 모든 샘플은 동일한 절차로 처리됩니다. - 샘플(활액, 생검, ..)은 모두 멸균 상태(마스크, 멸균 장갑, 조심스러운 피부 준비 및 타월링)에서 수술 중, 침대 옆에서 천자 흡인 또는 유도 초음파 촬영으로 회수되어 멸균 튜브에 담아 세균과로 이송됩니다. 12시간 이내에 기판을 추가합니다. - 골관절염에 적용되는 지침에 따라 세균학적 절차를 시행한다. · 액체 검체: 적혈구 및 백혈구 수, 다형핵 백분율 · 고형 검체: 기계 장치를 사용하여 분쇄 · 그람 및 아우라민 염색 · 컬럼비아 양 혈액 한천에서 37°C 배양 (5일 동안 호기성 및 혐기성), IsoVitaleX가 보충된 초콜릿 한천(5일 동안 5% CO2 포함), brain heart infusion broth(15일 동안 혐기성, 동일한 한천 배지에서 10일 후 계대 배양을 수행했습니다. 흐림).· 마이코박테리아 배양 : Lowenstein-Jensen 및 COLETSOS 배지, MGIT 3개월 배양.- 분자 절차·DNA 조작 PCR 전 및 후: 외부 DNA로 샘플이 오염되는 것을 방지하기 위해 별도의 피펫팅 장치가 있는 별도의 방에서. · Pre-PCR 단계에 사용되는 장비: DNA-free 및 UV 조사. · Boom의 방법에 기반한 DNA 추출: QIAGEN 키트 및 EZ1 BioRobot · 광범위한 16S rRNA 유전자 증폭 · Amplicons: ABIPRISM 3100 분석기(Applied Bio systems, COURTABOEUF, 프랑스)에서 양방향으로 시퀀싱. · 하나의 샘플에서 여러 염기서열에 대한 클로닝 실험 · 염기서열 분석: 국립생명공학정보센터 홈페이지를 통해 BLASTN 프로그램을 이용한 GenBank. · Internal control PCR: b-actin gene· Real time PCR: 마이코박테리아 및 임균성 관절염 검출용- 잠재적 영향: 지금까지 발표된 대부분의 연구와 마찬가지로 분자적 방법을 다른 진단 방법과 비교하기 위해 선택할 수 있었습니다. (문화, 조직학). 그러나 현재 표준이 없으며 골관절염의 진단은 일반적으로 논쟁의 축적에 달려 있습니다. 전문가 그룹의 규칙은 포함된 각 환자가 "감염"되는지 여부를 오류 가능성을 최소화하면서 결정하는 것입니다. 이 방법론은 일상적인 임상 현실에 가깝고 환자를 치료하는 의사를 신뢰합니다. 연구가 우리 그룹의 고전적 방법에 비해 분자 생물학의 이점을 보여주면 골관절염의 진단 다이어그램을 논의하는 것이 정당화될 것입니다.