Molekulare Mikrobiologie bei Osteoarthritis-Infektionen (MOLOS)

Hintergrund: Osteoartikuläre Infektionen sind schmerzhafte und behindernde Erkrankungen, die eine an die beteiligten Mikroorganismen angepasste antimikrobielle Behandlung erfordern. Mikrobiologische Kulturen gelten derzeit als Referenz für die Identifizierung pathogener Bakterien, und es scheint, dass die mikrobiologischen Kulturen in den meisten Fällen ausreichen, um die Diagnose zu stellen. Die Sensitivität dieser Kulturen ist jedoch sehr unterschiedlich und hängt sowohl vom Kontext, in dem klinische Proben entnommen werden, als auch vom jeweiligen Erreger ab. Darüber hinaus zeigen frühere experimentelle Daten, dass molekulare Methoden eine Diagnose liefern könnten, die bei herkömmlichen Kulturen fehlt. Hauptziel: Ziel der Studie ist es, die diagnostischen Leistungen mikrobiologischer Kulturen und molekularer Methoden zu bewerten, indem bei der Definition von Fällen eine Anhäufung klinischer, radiologischer und biologischer Argumente berücksichtigt wird, die normalerweise zur Erstellung der Diagnose von Knochen- und Gelenkinfektionen verwendet werden. Die Diskrepanz der beiden Methoden wird von einer Expertengruppe für osteoartikuläre Infektionen (bestehend aus einem Bakteriologen, einem Radiologen, einem Chirurgen, einem Anatomie-Pathologen und einem Rheumatologen) sekundär klassifiziert Infektionen.Sekundäres Ziel:Quantifizierung der Verzögerung der durch die beiden Methoden erzielten Ergebnisse. Studiendesign: · Ein auf osteoartikuläre Infektionen spezialisiertes Zentrum. · Prospektive Beobachtungsstudie. · Zwei Diagnosemethoden: Kulturen und molekulare Methoden Patienten: Insgesamt 284 Patienten, bestehend aus 194 Fällen und 90 Kontrollen. Eingeschlossene Patienten (n = 194) haben alle eine Verdachtsdiagnose für osteoartikuläre Infektionen, einschließlich Diskitis, septischer Arthritis und Protheseninfektion, definiert durch Einschlusskriterien. Die Ergebnisse der eingeschlossenen Patienten werden verglichen zu denen aus der Gruppe der Kontrollpatienten (n=90). Dauer des Protokolls: Die Studiendauer beträgt 6 Monate für jeden Patienten. Die Dauer des Protokolls ist für 2 Jahre geplant. Verfahren: Alle Proben werden mit dem gleichen Verfahren behandelt - Proben (Synovialflüssigkeiten, Biopsien, ..) werden entweder während der Operation, durch Punktion am Krankenbett oder durch geführte Sonographie gewonnen, alles unter sterilen Bedingungen (Maske, sterile Handschuhe, sorgfältige Hautvorbereitung und -handtücher) und in sterilen Röhrchen ohne zur Bakteriologie transportiert zusätzliches Substrat in weniger als 12 Stunden. - Bakteriologische Verfahren werden gemäß den Richtlinien durchgeführt, die für osteoartikuläre Infektionen gelten · Flüssige Proben: Erythrozyten- und Leukozytenzählung, polymorphonuklearer Prozentsatz · Feste Proben: mit einem mechanischen Gerät zerkleinert · Gram- und Auramin-Färbung · Kulturen bei 37 °C auf Columbia-Schaf-Blutagar (aerob und anaerob für 5 Tage), Schokoladenagar ergänzt mit IsoVitaleX (mit 5 % CO2 für 5 Tage), Hirn-Herz-Infusionsbrühe (anaerob für 15 Tage mit Subkulturen, die nach 10 Tagen auf dem gleichen Agarmedium angelegt wurden, auch wenn das Aspekt nicht war wolkig).· Mykobakterielle Kultur: Lowenstein-Jensen- und COLETSOS-Medium, MGIT inkubiert für 3 Monate.- Molekulare Verfahren · DNA-Manipulationen vor und nach der PCR: in getrennten Räumen mit separaten Pipettiervorrichtungen, um eine Kontamination der Proben mit fremder DNA zu verhindern. · In Vor-PCR-Schritten verwendete Ausrüstung: DNA-frei und UV-bestrahlt. · DNA-Extraktion basierend auf der Boom-Methode: QIAGEN-Kit und EZ1 BioRobot · Breitband-16S-rRNA-Genamplifikation · Amplikons: Sequenzierung in beiden Richtungen auf einem ABIPRISM 3100-Analysegerät (Applied Bio Systems, COURTABOEUF, Frankreich). · Klonierungsexperimente für mehrere Sequenzen in einer Probe · Sequenzanalyse: GenBank unter Verwendung des BLASTN-Programms über die Website des National Center of Biotechnology Information.· Interne Kontroll-PCR: b-Aktin-Gen · Real-Time-PCR: zum Nachweis von Mykobakterien und Gonokokken-Arthritis- Mögliche Implikationen: Wir hätten uns, wie die meisten bisher veröffentlichten Studien, dafür entscheiden können, unsere molekulare Methode mit einer anderen Diagnosemethode zu vergleichen (Kultur, Histologie). Allerdings gibt es derzeit keinen Goldstandard und die Diagnose osteoartikulärer Infektionen beruht im Allgemeinen auf einer Anhäufung von Argumenten. Die Regel der Expertengruppe besteht darin, mit möglichst wenigen Fehlern festzustellen, ob jeder eingeschlossene Patient „infiziert“ ist. Diese Methodik ist nah an der täglichen klinischen Realität und vertraut dem Arzt, der den Patienten behandelt. Wenn die Studie einen Vorteil der Molekularbiologie gegenüber klassischen Methoden in unseren Gruppen zeigt, wäre es gerechtfertigt, das Diagnosediagramm osteoartikulärer Infektionen zu diskutieren.