Moleculaire microbiologie bij artrose-infectie (MOLOS)

Achtergrond: Osteoarticulaire infecties zijn pijnlijke en invaliderende ziekten die een antimicrobiële behandeling vereisen die is aangepast aan de betrokken micro-organismen. Microbiologische kweken worden momenteel beschouwd als de referentie voor identificatie van pathogene bacteriën en het lijkt erop dat de microbiologische kweken in de meeste gevallen voldoende zijn om de diagnose vast te stellen. De gevoeligheid van deze culturen is echter zeer variabel en hangt zowel af van de context waarin klinische monsters worden genomen als van de betrokken ziekteverwekker. Bovendien tonen eerdere experimentele gegevens aan dat moleculaire methoden een diagnose kunnen opleveren die ontbreekt in conventionele culturen. Hoofddoel: Het doel van de studie is het evalueren van de diagnostische prestaties van microbiologische culturen en moleculaire methoden door voor de definitie van gevallen rekening te houden met een opeenstapeling van klinische, radiologische en biologische argumenten die gewoonlijk worden gebruikt om de diagnose van bot- en gewrichtsinfecties vast te stellen. De discrepantie tussen de twee methoden zal secundair worden geclassificeerd door een expertgroep voor osteoarticulaire infectie (samengesteld door een bacterioloog, een radioloog, een chirurg, een anatomie-patholoog en een reumatoloog). Geteste hypothese: Interesse in moleculaire methoden voor de diagnose van osteoarticulaire infecties.Secundaire doelstelling:Kwantificering van de vertraging van de resultaten verkregen door de twee methoden Onderzoeksopzet: · Eén centrum gespecialiseerd in osteo-articulaire infecties · Observationele prospectieve studie · Twee diagnosemethoden: culturen en moleculaire methoden · Een expertgroep Inclusief patiënten en aantal patiënten: totaal van 284 patiënten, samengesteld uit 194 gevallen en 90 controles. Geïncludeerde patiënten (n=194) zullen allemaal een vermoedelijke diagnose van osteoarticulaire infecties hebben, waaronder discitis, septische artritis en prothetische gewrichtsinfectie gedefinieerd door inclusiecriteria. De resultaten van de geïncludeerde patiënten zullen worden vergeleken vergeleken met die verkregen uit de groep van controlepatiënten (n=90).Protocol van duur: De duur van het onderzoek is 6 maanden voor elke patiëntDe duur van het protocol is gepland voor 2 jaarProcedures:Alle monsters worden behandeld met dezelfde procedure biopten, ..) worden ofwel tijdens de operatie, ofwel door middel van punctie aan het bed, ofwel door geleide echografie teruggewonnen, dit alles onder steriele omstandigheden (masker, steriele handschoenen, zorgvuldige voorbereiding van de huid en handdoek) en in steriele buisjes naar de afdeling Bacteriologie vervoerd zonder extra substraat in minder dan 12 uur. - Bacteriologische procedures worden uitgevoerd volgens de richtlijnen voor osteo-articulaire infectie · Vloeistofmonsters: aantal erytrocyten en leukocyten, polymorfonucleair percentage · Vaste monsters: fijngemaakt met behulp van een mechanisch apparaat · Gram- en auraminekleuring · Kweken bij 37°C op Columbia schapenbloed-agar (aëroob en anaëroob gedurende 5 dagen), chocolade-agar aangevuld met IsoVitaleX (met 5% CO2 gedurende 5 dagen), hersenhart-infusiebouillon (anaëroob gedurende 15 dagen met subculturen na 10 dagen op dezelfde agar-media, zelfs als aspect niet was bewolkt).· Mycobacteriële cultuur: Lowenstein-Jensen en COLETSOS-media, MGIT geïncubeerd gedurende 3 maanden.- Moleculaire procedures · DNA-manipulaties pre- en post-PCR: in aparte kamers met aparte pipetteerapparaten om besmetting van monsters met vreemd DNA te voorkomen. · Apparatuur gebruikt in pre-PCR-stappen: DNA-vrij en UV-bestraald. · DNA-extractie op basis van de methode van Boom: QIAGEN-kit en EZ1 BioRobot · Breed bereik 16S rRNA-genamplificatie · Amplicons: sequentiebepaling in beide richtingen op een ABIPRISM 3100-analysator (Applied Bio systems, COURTABOEUF, Frankrijk). · Kloneringsexperimenten voor verschillende sequenties in één monster · Analyse van sequentie: GenBank met behulp van het BLASTN-programma via de website van het National Center of Biotechnology Information. Interne controle-PCR: b-actine-gen Real-time PCR: voor de detectie van mycobacteriën en gonokokkenartritis Mogelijke implicaties: we hadden ervoor kunnen kiezen, zoals de meeste tot nu toe gepubliceerde studies, om onze moleculaire methode te vergelijken met een andere diagnosemethode (cultuur, histologie). Er is momenteel echter geen gouden standaard en de diagnose van osteoarticulaire infecties berust over het algemeen op een opeenstapeling van argumenten. De regel van de expertgroep is om met minder mogelijke fouten te bepalen of elke opgenomen patiënt "besmet" zal zijn. Deze methodologie staat dicht bij de dagelijkse klinische realiteit en wordt vertrouwd door de arts die de patiënt behandelde. Als de studie een voordeel laat zien van de moleculaire biologie versus klassieke methoden in onze groepen, dan zou het gerechtvaardigd zijn om het diagnoseschema van osteoarticulaire infecties te bespreken.