唾液全体の細菌プロファイルに対する 2 週間の砂糖ストレスの影響

目的

この研究の目的は、健康な若年成人を対象に、プロバイオティクス サプリメントを使用した場合と使用しない場合の 2 週間の糖刺激の前後で、唾液全体の細菌プロファイルを調査することです。 2 番目の目的は、糖ストレスの終了後 3 週間の細菌プロファイルを研究することです。 帰無仮説は次のとおりです。

1. スクロース誘発ストレスは、非発酵性ペンチトール（キシリトール）によって誘発されるストレスと比較して、唾液全体の細菌プロファイルに影響を与えません
2. 乳酸桿菌由来のプロバイオティクス細菌の摂取は、プラセボと比較した場合、唾液中の細菌プロファイルの糖による変化に影響を与えません
3. 唾液中の細菌プロファイルは、介入終了後 3 週間でベースラインと変わらない。

材料 研究グループは、インフォームド コンセントの後に志願する、口内の健康状態が損なわれていない 80 人の若年成人で構成されます。 選択基準は、i) 18 歳以上で 20 本以上の天然歯があること、ii) 唾液機能に影響を与える慢性全身疾患がないこと、iii) 避妊薬以外の投薬を受けていないこと、および iv) 非喫煙者であることです。 プロジェクトは倫理的承認のために提出されます。

研究デザイン この研究では、図 1 に示すように、4 つの平行アームを使用した無作為化三重盲検プラセボ対照デザインを採用します。 グループの割り当ては、コンピューターで生成された封筒を介して配置され、すべての部分 (被験者、研究者、実験室スタッフ) が隠されます。 ベースライン登録 (0 日目) の後、参加者は、14 日間 (14 日目) の間、2 時間ごとに 10 mL のスクロースまたはキシリトール含有溶液で口をすすぐように求められます (1 日あたり 7-8 回)。 解決策は、少なくとも 30 秒間、歯の周りと歯の間で「スウィッシュ」してから、吐き出す必要があります。 水での後すすぎは許可されていません。 さらに、被験体には、14日間のすすぎ期間中、毎日使用するために、プロバイオティクス乳酸菌またはプラセボのいずれかを含む錠剤が提供されます。 参加者は、日常の口腔衛生手順だけでなく、通常の飲食習慣を維持するように徹底的に指示されます。

介入 - プロバイオティクスおよびプラセボ 14 日間の介入期間のアクティブおよびプラセボ トローチは、ベースライン検査およびサンプリング後に参加者に配布されます。 アクティブ トローチには 2 種類のプロバイオティック バクテリアが含まれています。 Lactobacillus rhamnosus PB01 (DSM 14869) および Lactobacillus curvatus EB10 (DSM 32307) をそれぞれ 109 コロニー形成単位の濃度で。 錠剤は、歯肉の炎症と微生物のエンドポイントを用いたランダム化比較試験で以前に使用されています (Keller et al., 2018)。 完全な構成は、付録 X に示されています。 プラセボ トローチは、バクテリアを除いて同じ組成で、同じサイズと味を持っています。 参加者は、定期的な歯磨きの後、1日2回（朝、夕方）、1錠を口の中でゆっくり溶かすように指示されています. 彼らはまた、砂糖リンスと錠剤の摂取をカバーする毎日の日誌を保管し、最初のフォローアップで消費されていない錠剤を返却する必要があります. 砂糖リンスはマークのないボトルで準備され配布され、参加者には10 mLを示す用量スプーンが提供されます. 参加者には、研究全体で使用する標準化されたフッ化物練り歯磨きも与えられます。 コペンハーゲン大学の独立したモニターが割り当ての隠蔽を保証します。

臨床検査と唾液サンプリング ベースラインでは、経験豊富で校正された歯科医が臨床検査を実施します。 レントゲン写真は露出しません。 次の変数が登録されています: a) 虫歯、欠損および充填歯 (DMFT) として表される虫歯の経験、b) 歯肉縁上のプラークの量 (s-PI)、c) 歯肉の炎症のレベル (s-GI)、およびd) ブリーディング オン プロービング (s-BOP)。 PI、GI、および BOP は、事前に選択された 6 本の歯で簡単な方法で採点され、14 日および 35 日後のフォローアップで再評価されます。 刺激された全唾液サンプル (約 1.0 mL) は、ベースライン時および 14 日後と 35 日後に、訓練を受けた 1 人の研究者によって標準化された方法で収集されます。 すべてのサンプルは、さらに処理するまで-80°Cで保存されます。

実験手順 DNA は、炎症研究所、Rigshospitalet、København、デンマークのメーカーのガイドラインに従って、Pathogen_Universal_200 プロトコル (Roche) を使用して抽出されます。 貴重な説明 (Keller et al., 2018) のように、唾液マイクロバイオームのプロファイルは、次世代シーケンシング (NGS) および qPCR で分析されます。

エンドポイント 唾液細菌プロファイルは、コペンハーゲン大学のコスタトン センターと協力して、次世代シーケンシング (HOMINGS) を使用したヒト口腔微生物同定によって分析されます。 副次的評価項目は、15 日後および 35 日後に採点された簡易プラーク インデックス (PI)、歯肉インデックス (GI)、およびブリーディング オン プロービング (BOP) です。

統計的手法 すべてのデータの正規性がチェックされ、IBM-SPSS ソフトウェアで処理されます。 臨床データは、ダンの比較とフリードマン テストを使用して比較されます。 細菌 DNA 読み取りの相対的な豊富さは、属および種レベルでサンプルのグループ間で比較されます。複数の従属分析のための Benjamini-Hochberg 補正を使用した Kruskal-Wallis および Mann-Whitney 検定を使用します。 0.05 未満の P 値は、統計的に有意と見なされます。