2 viikon sokeristressin vaikutus koko syljen bakteeriprofiileihin

Tavoite

Tämän tutkimuksen tavoitteena on tutkia bakteeriprofiileja koko syljessä ennen ja jälkeen 2 viikon sokeriprovokaatiota probioottien kanssa ja ilman niitä terveillä nuorilla aikuisilla. Toinen tavoite on tutkia bakteeriprofiileja 3 viikkoa sokeristressin päättymisen jälkeen. Nollahypoteesit ovat:

1. Sakkaroosin aiheuttama stressi ei vaikuta koko syljen bakteeriprofiileihin verrattuna ei-fermentoituvan pentitolin (ksylitolin) aiheuttamaan stressiin.
2. Laktobasilliperäisten probioottisten bakteerien saanti ei vaikuta sokerin aiheuttamiin muutoksiin koko syljen bakteeriprofiileissa lumelääkkeeseen verrattuna
3. Syljen bakteeriprofiilit eivät poikkea lähtötasosta 3 viikon kuluttua toimenpiteen päättymisestä.

Materiaali Tutkimusryhmä koostuu 80 nuoresta aikuisesta, joilla on tinkimätön suuterveys ja jotka osallistuvat vapaaehtoisuuteen tietoisen suostumuksensa jälkeen. Osallistumiskriteerit ovat i) yli 18-vuotias, jolla on yli 20 omaa luonnollista hammasta, ii) ei kroonisia syljen toimintaan vaikuttavia systeemisiä sairauksia, iii) ei lääkitystä, lukuun ottamatta ehkäisyvälineitä ja iv) tupakoimattomuus. Hanke toimitetaan eettiseen hyväksyntään.

Tutkimussuunnitelma Tutkimuksessa käytetään satunnaistettua kolmoissokkoutettua, lumekontrolloitua mallia, jossa on neljä rinnakkaista haaraa kuvan 1 mukaisesti. Ryhmäjako järjestetään tietokoneella luotujen kirjekuorien kautta ja piilotetaan kaikilta osiltaan (kohteet, tutkijat, laboratoriohenkilöstö). Perusrekisteröinnin jälkeen (päivä 0) osallistujia pyydetään huuhtelemaan suunsa 10 ml:lla sakkaroosia tai ksylitolia sisältävää liuosta joka toinen tunti (7-8 kertaa päivässä) 14 päivän ajan (päivä 14). Liuosta tulee "huuhtella" hampaiden ympärillä ja välissä vähintään 30 sekuntia ja sylkeä sitten ulos. Jälkihuuhtelu vedellä ei ole sallittua. Lisäksi koehenkilöille tarjotaan tabletteja, jotka sisältävät joko probioottisia laktobasilleja tai lumelääkettä päivittäiseen käyttöön 14 päivän huuhtelujakson aikana. Osallistujia opastetaan perusteellisesti noudattamaan normaaleja ruokailu- ja juomistottumuksiaan sekä päivittäisiä suuhygieniatoimenpiteitä.

Interventio - probiootit ja lumelääke Aktiiviset ja lumelääkkeet 14 päivän interventiojakson aikana jaetaan osallistujille perustutkimuksen ja näytteenoton jälkeen. Aktiiviset imeskelytabletit sisältävät kaksi probioottibakteerikantaa; Lactobacillus rhamnosus PB01 (DSM 14869) ja Lactobacillus curvatus EB10 (DSM 32307) pitoisuudella 109 pesäkettä muodostavaa yksikköä kumpikin. Tabletteja on aiemmin käytetty satunnaistetussa kontrolloidussa tutkimuksessa ientulehdusten ja mikrobien päätepisteiden kanssa (Keller et al., 2018). Koko kokoonpano on esitetty liitteessä X. Plasebo-imeskelytableteilla on bakteereja lukuun ottamatta identtinen koostumus, sama koko ja maku. Osallistujia neuvotaan antamaan yhden tabletin hitaasti liueta suussa kaksi kertaa päivässä (aamulla, illalla) säännöllisen hampaiden harjauksen jälkeen. Heidän on myös pidettävä päiväkirjaa sokerihuuhteluista ja tablettien nauttimisesta sekä palautettava käyttämättä jäänyt tabletti ensimmäisellä tarkastuksella. Sokerihuuhtelut valmistetaan ja jaetaan merkitsemättömissä pulloissa ja osallistujille toimitetaan annoslusikka, jossa on 10 ml. Osallistujille annetaan myös standardoitu fluorihammastahna käytettäväksi koko tutkimuksen ajan. Kööpenhaminan yliopiston riippumaton tarkkailija takaa allokoinnin salailun.

Kliininen tutkimus ja sylkinäytteet Lähtötilanteessa kliinisen tutkimuksen suorittaa yksi kokenut ja kalibroitu hammaslääkäri. Röntgenkuvia ei paljasteta. Rekisteröidään seuraavat muuttujat: a) karieskokemus, ilmaistuna reikiintyneinä, puuttuneina ja täytetyinä hampaina (DMFT), b) supragingivaalisen plakin määrä (s-PI), c) ientulehduksen taso (s-GI) ja d) verenvuoto luotauksessa (s-BOP). PI-, GI- ja BOP-arvot pisteytetään yksinkertaistetusti kuudelle ennalta valitulle hampaalle ja arvioidaan uudelleen seurannassa 14 ja 35 päivän kuluttua. Yksi koulutettu tutkija kerää stimuloidut kokosylkinäytteet (noin 1,0 ml) lähtötilanteessa ja 14 ja 35 päivän kuluttua standardoidulla tavalla. Kaikki näytteet säilytetään -80°C:ssa jatkokäsittelyyn asti.

Laboratoriotoimenpiteet DNA uutetaan käyttämällä Pathogen_Universal_200-protokollaa (Roche) valmistajan ohjeiden mukaisesti Institute for Inflammatory Research, Rigshospitalet, København, Danmark. Syljen mikrobiomin profiilit analysoidaan seuraavan sukupolven sekvenssin (NGS) ja qPCR:n avulla tarkasti kuvatulla tavalla (Keller et al., 2018).

Päätepisteet Syljen bakteeriprofiilit analysoidaan Human Oral Microbe Identification -menetelmällä käyttäen Next Generation Sequencing (HOMINGS) -menetelmää yhteistyössä Kööpenhaminan yliopiston Costerton Centerin kanssa. Toissijaisia ​​päätepisteitä ovat yksinkertaistettu plakkiindeksi (PI), ienindeksi (GI) ja verenvuoto koetuksella (BOP), jotka on pisteytetty 15 ja 35 päivän jälkeen.

Tilastolliset menetelmät Kaikki tiedot tarkistetaan normaaliuden suhteen ja käsitellään IBM-SPSS-ohjelmistolla. Kliinisiä tietoja verrataan Freidmanin testillä Dunnin vertailuun. Bakteerien DNA-lukemien suhteellista runsautta verrataan näyteryhmien välillä suku- ja lajitasolla käyttämällä Kruskal-Wallis- ja Mann-Whitney-testejä Benjamini-Hochberg-korjauksella useisiin riippuvaisiin analyyseihin. P-arvot alle 0,05 katsotaan tilastollisesti merkitseviksi.