为期两周的糖胁迫对整个唾液中细菌谱的影响

客观的

本研究的目的是调查在健康年轻人中使用和不使用益生菌补充剂进行为期 2 周的糖刺激前后整个唾液中的细菌概况。 第二个目标是在糖胁迫终止后 3 周研究细菌概况。 零假设是：

1. 与不可发酵的戊糖醇（木糖醇）引起的压力相比，蔗糖引起的压力不会影响整个唾液中的细菌分布
2. 与安慰剂相比，摄入乳杆菌衍生的益生菌不会影响糖诱导的整个唾液细菌谱的变化
3. 干预终止后 3 周，唾液中的细菌谱与基线没有差异。

材料 该研究小组将由 80 名口腔健康状况良好的年轻人组成，他们在知情同意后自愿参加。 纳入标准是 i) 18 岁以上，拥有超过 20 颗天然牙齿，ii) 没有影响唾液功能的慢性全身性疾病，iii) 除了避孕药之外没有药物治疗，以及 iv) 不吸烟。 该项目将提交伦理审批。

研究设计 该研究将采用随机三盲、安慰剂对照设计，具有四个平行臂，如图 1 所示。 分组分配将通过计算机生成的信封进行安排，并对所有部分（受试者、研究人员、实验室工作人员）进行隐藏。 基线登记后（第 0 天），要求参与者在 14 天（第 14 天）期间每隔一小时（每天 7-8 次）用 10 mL 含蔗糖或木糖醇的溶液漱口。 溶液应在牙齿周围和牙齿之间“漱口”至少 30 秒，然后吐出。 不允许用水进行后冲洗。 此外，在 14 天的冲洗期间，向受试者提供含有益生菌乳酸杆菌或安慰剂的药片，供其每天服用。 将彻底指导参与者保持正常的饮食习惯以及日常口腔卫生程序。

干预——益生菌和安慰剂 14 天干预期的活性和安慰剂含片将在基线检查和取样后分发给参与者。 活性锭剂含有两种益生菌菌株；鼠李糖乳杆菌 PB01 (DSM 14869) 和弯曲乳杆菌 EB10 (DSM 32307) 的浓度均为 109 个菌落形成单位。 这些药片先前已用于牙龈炎症和微生物终点的随机对照试验（Keller 等人，2018 年）。 完整的组成见附录 X。 安慰剂锭剂具有相同的成分，除了细菌，具有相同的大小和味道。 指示参与者在定期刷牙后每天两次（早上、晚上）让一颗药片在口中缓慢溶解。 他们还需要保留一份包含糖冲洗和药片摄入量的每日日志，并在第一次随访时归还未食用的药片。 糖冲洗液将准备好并装在无标记的瓶子中分发，参与者将获得一个指示 10 mL 的剂量勺。 参与者还将获得标准化的含氟牙膏，供在整个研究期间使用。 哥本哈根大学的独立监督员将保证分配的隐蔽性。

临床检查和唾液取样 在基线时，由一名经验丰富且经过校准的牙医进行临床检查。 没有射线照片曝光。 记录了以下变量：a) 龋齿经历，表示为蛀牙、缺失牙和补牙 (DMFT)，b) 龈上菌斑的数量 (s-PI)，c) 牙龈炎症水平 (s-GI)，以及d) 探查出血 (s-BOP)。 PI、GI 和 BOP 将以简化的方式对六颗预先选择的牙齿进行评分，并在 14 天和 35 天后的随访中重新评估。 受过刺激的全唾液样本（约 1.0 mL）将由一名训练有素的调查员以标准化方式在基线时以及 14 天和 35 天后收集。 所有样品都储存在 -80°C 直至进一步处理。

实验室程序 DNA 将使用 Pathogen_Universal_200 方案（Roche）根据丹麦哥本哈根 Rigshospitalet 炎症研究所的制造商指南提取。 唾液微生物组的概况将使用下一代测序 (NGS) 和 qPCR 进行分析，如珍贵描述（Keller 等人，2018）。

终点唾液细菌概况将通过与哥本哈根大学科斯特顿中心合作使用下一代测序 (HOMINGS) 的人类口腔微生物鉴定来分析。 次要终点是在 15 天和 35 天后评分的简化菌斑指数 (PI)、牙龈指数 (GI) 和探诊出血 (BOP)。

统计方法 将检查所有数据的正态性并使用 IBM-SPSS 软件进行处理。 使用 Freidman 检验与 Dunn 比较来比较临床数据。 使用 Kruskal-Wallis 和 Mann-Whitney 检验以及针对多重相关分析的 Benjamini-Hochberg 校正，在属和种水平的样本组之间比较细菌 DNA 读数的相对丰度。 小于 0.05 的 P 值将被视为具有统计学意义。