A 2 hetes cukorstressz hatása a teljes nyál bakteriális profiljára

Célkitűzés

Ennek a tanulmánynak a célja a teljes nyálban lévő bakteriális profilok vizsgálata egészséges fiatal felnőttek 2 hetes cukorprovokációja előtt és után probiotikus kiegészítőkkel vagy anélkül. A másik cél a bakteriális profilok tanulmányozása a cukorstressz megszűnése után 3 héttel. A nullhipotézisek a következők:

1. A szacharóz által kiváltott stressz nem befolyásolja a teljes nyál bakteriális profilját, összehasonlítva a nem fermentálható pentitol (xilit) által kiváltott stresszel
2. A laktobacillusokból származó probiotikus baktériumok bevitele nem befolyásolja a teljes nyálban a baktériumok profiljának cukor által kiváltott változásait a placebóval összehasonlítva
3. A nyál bakteriális profilja a beavatkozás befejezése után 3 héttel nem tér el az alapértéktől.

Anyag A vizsgálócsoport 80 olyan fiatal felnőttből áll, akiknek nem megfelelő szájhigiénéjük van, akik önkéntes beleegyezést követően jelentkeznek. A bekerülési kritériumok a következők: i) 18 éven felüli, 20-nál több saját természetes foggal, ii) nem szenved a nyálműködést befolyásoló krónikus szisztémás betegségben, iii) nincs gyógyszeres kezelés, kivéve a fogamzásgátlót, és iv) nemdohányzó. A projektet etikai jóváhagyásra nyújtják be.

A vizsgálat felépítése A vizsgálat randomizált hármasvak, placebo-kontrollos elrendezést alkalmaz, négy párhuzamos karral, az 1. ábrán látható módon. A csoportok felosztása számítógéppel generált borítékokon keresztül történik, és minden rész (alanyai, vizsgálók, laboratóriumi személyzet) számára elrejtve történik. Az alapszintű regisztráció után (0. nap) a résztvevőket arra kérik, hogy 14 napon keresztül (14. nap) minden második órában (napi 7-8 alkalommal) öblítsék ki a szájukat 10 ml szacharóz- vagy xilit tartalmú oldattal. Az oldatot legalább 30 másodpercig kell "suhintani" a fogak körül és között, majd kiköpni. Vizes utóöblítés nem megengedett. Ezenkívül az alanyok probiotikus laktobacillust vagy placebót tartalmazó tablettákat kapnak napi használatra a 14 napos öblítési időszak alatt. A résztvevők alapos oktatást kapnak normál étkezési és ivási szokásaik, valamint napi szájhigiénés eljárásaik megtartására.

Beavatkozás - probiotikumok és placebo A 14 napos beavatkozási időszakra szánt aktív és placebo pasztillákat az alapszintű vizsgálat és mintavétel után osztják ki a résztvevőknek. Az aktív pasztillák két probiotikus baktérium törzset tartalmaznak; Lactobacillus rhamnosus PB01 (DSM 14869) és Lactobacillus curvatus EB10 (DSM 32307) 109 telepképző egység koncentrációban. A tablettákat korábban randomizált, kontrollos vizsgálatban használták ínygyulladással és mikrobiális végpontokkal (Keller et al., 2018). A teljes összetétel a X. mellékletben látható. A placebo pasztillák azonos összetételűek, kivéve a baktériumokat, azonos méretűek és ízűek. A résztvevőket arra utasítják, hogy a rendszeres fogmosás után naponta kétszer (reggel, este) hagyják lassan feloldódni a szájban egy tablettát. Emellett kötelesek napi naplót vezetni a cukoröblítésekről és a tablettabevitelről, és az el nem fogyasztott tablettát az első utánkövetéskor vissza kell adniuk. A cukoröblítőket nem jelölt palackokban készítik el és osztják ki, a résztvevőket pedig egy 10 ml-es adagolókanállal látják el. A résztvevők szabványos fluoridos fogkrémet is kapnak, amelyet a vizsgálat teljes ideje alatt használhatnak. A Koppenhágai Egyetemen működő független ellenőr garantálja a kiosztás eltitkolását.

Klinikai vizsgálat és nyálmintavétel Kiinduláskor a klinikai vizsgálatot egy tapasztalt és kalibrált fogorvos végzi. Röntgenfelvételek nincsenek kitéve. A következő változókat regisztrálják: a) szuvasodás, hiányos és tömött fogak (DMFT), b) szupragingivális plakk mennyisége (s-PI), c) ínygyulladás mértéke (s-GI), ill. d) vérzés szondázáskor (s-BOP). A PI-t, a GI-t és a BOP-t leegyszerűsített módon pontozzák hat előre kiválasztott fogon, és újraértékelik a 14. és 35. nap utáni utóvizsgálatokon. Stimulált teljes nyálmintákat (körülbelül 1,0 ml) az alapvonalon, valamint 14 és 35 nap elteltével szabványosított módon egy képzett vizsgáló gyűjt. Minden mintát -80°C-on tárolunk a további feldolgozásig.

Laboratóriumi eljárások A DNS-t a Pathogen_Universal_200 protokoll (Roche) alkalmazásával vonják ki a gyártó útmutatásaival összhangban az Institute for Inflammatory Research, Rigshospitalet, København, Danmark. A nyálmikrobiom profilját Next Generation Sequencing (NGS) és qPCR segítségével elemzik, amint azt pontosan leírták (Keller et al., 2018).

Végpontok A nyálbaktérium-profilokat a következő generációs szekvenálás (HOMINGS) segítségével a Human Oral Microbe Identification (Humán orális mikrobaazonosítás) segítségével elemzik a Koppenhágai Egyetem Costerton Központjával együttműködve. A másodlagos végpontok az egyszerűsített plakk index (PI), az ínyindex (GI) és a vérzés szondázáskor (BOP), amint azt 15 és 35 nap után értékelik.

Statisztikai módszerek Minden adatot ellenőriznek a normál állapot szempontjából, és az IBM-SPSS szoftverrel dolgozzák fel. A klinikai adatokat Freidman teszttel hasonlítjuk össze Dunn-féle összehasonlítással. A bakteriális DNS-leolvasások relatív abundanciáját a minták csoportjai között nemzetség és faj szinten hasonlítják össze Kruskal-Wallis és Mann-Whitney tesztek segítségével Benjamini-Hochberg korrekcióval több függő elemzéshez. A 0,05-nél kisebb P-értékek statisztikailag szignifikánsnak minősülnek.