Effekten av en 2-veckors sockerstress på bakterieprofiler i hela saliven

Mål

Syftet med denna studie är att undersöka bakterieprofilerna i hel saliv före och efter en 2-veckors sockerprovokation med och utan probiotikatillskott hos friska unga vuxna. Ett andra syfte är att studera bakterieprofilerna 3 veckor efter att sockerstressen upphört. Nollhypotesen är:

1. Sackaros-inducerad stress påverkar inte bakterieprofilerna i hel saliv jämfört med stress inducerad av en icke-fermenterbar pentitol (xylitol)
2. Intaget av probiotiska bakterier härrörande från laktobaciller påverkar inte de sockerinducerade förändringarna i bakterieprofilerna i hel saliv jämfört med placebo
3. Bakterieprofilerna i saliven skiljer sig inte från baslinjen 3 veckor efter avslutad intervention.

Material Studiegruppen kommer att bestå av 80 unga vuxna med kompromisslös munhälsa som ställer upp frivilligt efter informerat samtycke. Inklusionskriterierna är i) över 18 år med mer än 20 egna naturliga tänder, ii) inga kroniska systemiska sjukdomar som påverkar salivfunktionerna, iii) ingen medicin förutom preventivmedel och iv) att vara icke-rökare. Projektet kommer att lämnas in för etiskt godkännande.

Studiedesign Studien kommer att använda en randomiserad trippelblind, placebokontrollerad design med fyra parallella armar som visas i figur 1. Grupptilldelningen kommer att ordnas genom datorgenererade kuvert och dold för alla delar (ämnen, utredare, laboratoriepersonal). Efter baslinjeregistreringen (dag 0) ombeds deltagarna att skölja munnen med 10 ml av en sackaros- eller xylitol-innehållande lösning varannan timme (7-8 gånger per dag) under 14 dagar (dag 14). Lösningen ska "svängas" runt och mellan tänderna i minst 30 sekunder och sedan spottas ut. Ingen efterspolning med vatten är tillåten. Dessutom förses försökspersonerna med tabletter innehållande antingen probiotiska laktobaciller eller placebo för daglig användning under den 14 dagar långa sköljningsperioden. Deltagarna kommer att instrueras noggrant i att bibehålla sina normala mat- och dryckesvanor samt sina dagliga munhygienprocedurer.

Intervention - probiotika och placebo De aktiva sugtabletterna och placebotabletterna för den 14-dagars interventionsperioden kommer att delas ut till deltagarna efter baslinjeundersökning och provtagning. De aktiva sugtabletterna innehåller två stammar av probiotiska bakterier; Lactobacillus rhamnosus PB01 (DSM 14869) och Lactobacillus curvatus EB10 (DSM 32307) i en koncentration av 109 kolonibildande enheter vardera. Tabletterna har tidigare använts i en randomiserad kontrollerad studie med gingival inflammation och mikrobiella effektmått (Keller et al., 2018). Hela sammansättningen visas i bilaga X. Placebotabletterna har en identisk sammansättning, förutom bakterierna, med samma storlek och smak. Deltagarna instrueras att låta en tablett sakta lösas upp i munnen två gånger per dag (morgon, kväll) efter vanlig tandborstning. De är också skyldiga att föra en daglig loggbok som täcker sockersköljningarna och tablettintaget och lämna tillbaka icke konsumerad tablett vid första uppföljningen. Sockersköljningarna kommer att förberedas och distribueras i omärkta flaskor och deltagarna kommer att förses med en dossked som visar 10 ml. Deltagarna kommer också att få en standardiserad fluortandkräm för användning under hela studien. En oberoende monitor vid Köpenhamns universitet kommer att garantera att tilldelningen döljs.

Klinisk undersökning och salivprovtagning Vid baslinjen görs en klinisk undersökning av en erfaren och kalibrerad tandläkare. Inga röntgenbilder exponeras. Följande variabler registreras: a) kariesupplevelse, uttryckt som ruttnade, missade och fyllda tänder (DMFT), b) mängden supragingivalt plack (s-PI), c) nivån av gingival inflammation (s-GI), och d) blödning vid sondering (s-BOP). PI, GI och BOP kommer att bedömas på ett förenklat sätt på sex förvalda tänder och omvärderas vid uppföljningarna efter 14 och 35 dagar. Stimulerade hela salivprover (cirka 1,0 ml) kommer att samlas in vid baslinjen och efter 14 och 35 dagar på ett standardiserat sätt av en utbildad prövare. Alla prover förvaras vid -80°C tills vidare bearbetning.

Laboratorieprocedurer DNA kommer att extraheras med ett Pathogen_Universal_200-protokoll (Roche) i enlighet med tillverkarens riktlinjer vid Institutet för Inflammatorisk Forskning, Rigshospitalet, Köpenhamn, Danmark. Profilerna för salivmikrobiomet kommer att analyseras med Next Generation Sequencing (NGS) och qPCR enligt beskrivningen (Keller et al., 2018).

Endpoints Salivbakterieprofiler kommer att analyseras med hjälp av Human Oral Microbe Identification med hjälp av Next Generation Sequencing (HOMINGS) i samarbete med Costerton Center vid Köpenhamns universitet. Sekundära endpoints är förenklat plackindex (PI), gingivalindex (GI) och blödning vid sondering (BOP) efter 15 och 35 dagar.

Statistiska metoder All data kommer att kontrolleras för normalitet och bearbetas med IBM-SPSS-programvaran. Kliniska data jämförs med Freidman-testet med Dunns jämförelse. Relativt överflöd av bakteriellt DNA-avläsningar jämförs mellan grupper av prover på genus- och artnivå med hjälp av Kruskal-Wallis- och Mann-Whitney-testerna med Benjamini-Hochberg-korrigering för flera beroende analyser. P-värden mindre än 0,05 kommer att betraktas som statistiskt signifikanta.