Efeito de um estresse de açúcar de 2 semanas nos perfis bacterianos na saliva total

Objetivo

O objetivo deste estudo é investigar os perfis bacterianos na saliva total antes e depois de uma provocação de açúcar de 2 semanas com e sem suplementos probióticos em adultos jovens saudáveis. Um segundo objetivo é estudar os perfis bacterianos 3 semanas após o término do estresse por açúcar. As hipóteses nulas são:

1. O estresse induzido por sacarose não afeta os perfis bacterianos na saliva total em comparação com o estresse induzido por um pentitol não fermentável (xilitol)
2. A ingestão de bactérias probióticas derivadas de lactobacilos não afeta as mudanças induzidas por açúcar nos perfis bacterianos na saliva total quando comparada com placebo
3. Os perfis bacterianos na saliva não diferem da linha de base 3 semanas após o término da intervenção.

Material O grupo de estudo consistirá em 80 adultos jovens com saúde bucal descomprometida que serão voluntários após consentimento informado. Os critérios de inclusão são i) maiores de 18 anos com mais de 20 dentes naturais próprios, ii) ausência de doenças sistêmicas crônicas que afetem as funções salivares, iii) ausência de medicação exceto anticoncepcionais, e iv) não ser fumante. O projeto será submetido à aprovação ética.

Projeto do estudo O estudo empregará um projeto randomizado, triplo-cego, controlado por placebo com quatro braços paralelos, conforme mostrado na Figura 1. A alocação dos grupos será organizada por meio de envelopes gerados por computador e ocultados para todas as partes (sujeitos, investigadores, equipe de laboratório). Após o registro da linha de base (Dia 0), os participantes são solicitados a enxaguar a boca com 10 mL de uma solução contendo sacarose ou xilitol a cada duas horas (7-8 vezes por dia) durante 14 dias (dia 14). A solução deve ser "agitada" ao redor e entre os dentes por pelo menos 30 segundos e depois cuspida. Não é permitida a lavagem posterior com água. Além disso, os indivíduos recebem comprimidos contendo lactobacilos probióticos ou placebo para uso diário durante o período de enxágue de 14 dias. Os participantes serão cuidadosamente instruídos a manter seus hábitos normais de alimentação e bebida, bem como seus procedimentos diários de higiene bucal.

Intervenção - probióticos e placebo As pastilhas ativas e placebo para o período de intervenção de 14 dias serão distribuídas aos participantes após exame inicial e amostragem. As pastilhas ativas contêm duas cepas de bactérias probióticas; Lactobacillus rhamnosus PB01 (DSM 14869) e Lactobacillus curvatus EB10 (DSM 32307) em uma concentração de 109 unidades formadoras de colônia cada. Os comprimidos foram usados ​​anteriormente em um estudo randomizado controlado com inflamação gengival e parâmetros microbianos (Keller et al., 2018). A composição completa é mostrada no Apêndice X. As pastilhas placebo têm composição idêntica, exceto pelas bactérias, com o mesmo tamanho e sabor. Os participantes são instruídos a deixar um comprimido se dissolver lentamente na boca duas vezes ao dia (manhã, noite) após a escovação regular dos dentes. Eles também são obrigados a manter um diário de bordo cobrindo os enxágues de açúcar e ingestão de comprimidos e devolver o comprimido não consumido no primeiro acompanhamento. Os enxagues de açúcar serão preparados e distribuídos em frascos não marcados e será fornecida aos participantes uma colher doseadora com indicação de 10 mL. Os participantes também receberão um creme dental com flúor padronizado para uso durante todo o estudo. Um monitor independente da Universidade de Copenhague garantirá a ocultação da alocação.

Exame clínico e amostras de saliva No início, um exame clínico é realizado por um dentista experiente e calibrado. Nenhuma radiografia é exposta. As seguintes variáveis ​​são registradas: a) experiência de cárie, expressa como dentes cariados, perdidos e obturados (CPOD), b) a quantidade de placa supragengival (s-PI), c) o nível de inflamação gengival (s-GI) e d) sangramento à sondagem (s-BOP). O IP, GI e BOP serão pontuados de forma simplificada em seis dentes pré-selecionados e reavaliados nos acompanhamentos após 14 e 35 dias. Amostras de saliva total estimulada (aproximadamente 1,0 mL) serão coletadas no início e após 14 e 35 dias de forma padronizada por um investigador treinado. Todas as amostras são armazenadas a -80°C até posterior processamento.

Procedimentos laboratoriais O DNA será extraído usando um protocolo Pathogen_Universal_200 (Roche) de acordo com as diretrizes do fabricante no Institute for Inflammatory Research, Rigshospitalet, København, Danmark. Os perfis do microbioma salivar serão analisados ​​com Next Generation Sequencing (NGS) e qPCR conforme descrito com precisão (Keller et al., 2018).

Endpoints Os perfis bacterianos salivares serão analisados ​​por meio da identificação de micróbios orais humanos usando sequenciamento de próxima geração (HOMINGS) em cooperação com o Costerton Center da Universidade de Copenhague. Os endpoints secundários são índice de placa simplificado (PI), índice gengival (GI) e sangramento à sondagem (BOP) conforme pontuado após 15 e 35 dias.

Métodos estatísticos Todos os dados serão verificados quanto à normalidade e processados ​​com o software IBM-SPSS. Os dados clínicos são comparados usando o teste de Freidman com a comparação de Dunn. A abundância relativa de leituras de DNA bacteriano é comparada entre grupos de amostras em nível de gênero e espécie usando os testes de Kruskal-Wallis e Mann-Whitney com correção de Benjamini-Hochberg para análises dependentes múltiplas. Valores de P inferiores a 0,05 serão considerados estatisticamente significativos.