Effect van een suikerstress van 2 weken op bacterieprofielen in heel speeksel

Objectief

Het doel van deze studie is om de bacterieprofielen in volledig speeksel te onderzoeken voor en na een suikerprovocatie van 2 weken met en zonder probiotische supplementen bij gezonde jonge volwassenen. Een tweede doel is om de bacterieprofielen te bestuderen 3 weken na het beëindigen van de suikerstress. De nulhypothese zijn:

1. Sucrose-geïnduceerde stress heeft geen invloed op de bacteriële profielen in volledig speeksel in vergelijking met stress veroorzaakt door een niet-fermenteerbare pentitol (xylitol)
2. De inname van van lactobacilli afgeleide probiotische bacteriën heeft geen invloed op de door suiker veroorzaakte veranderingen in de bacterieprofielen in volledig speeksel in vergelijking met placebo
3. De bacterieprofielen in speeksel verschillen niet van baseline 3 weken na beëindiging van de ingreep.

Materiaal De onderzoeksgroep zal bestaan ​​uit 80 jongvolwassenen met een onberispelijke mondgezondheid die zich na geïnformeerde toestemming vrijwillig aanmelden. De inclusiecriteria zijn i) ouder dan 18 jaar met meer dan 20 eigen natuurlijke tanden, ii) geen chronische systemische ziekten die de speekselfunctie aantasten, iii) geen medicatie behalve voorbehoedsmiddelen, en iv) niet-roker zijn. Het project zal worden voorgelegd voor ethische goedkeuring.

Onderzoeksopzet Het onderzoek zal een gerandomiseerd, drievoudig blind, placebogecontroleerd ontwerp gebruiken met vier parallelle armen, zoals weergegeven in figuur 1. De groepstoewijzing wordt geregeld via computergegenereerde enveloppen en verborgen voor alle onderdelen (proefpersonen, onderzoekers, laboratoriumpersoneel). Na de basislijnregistratie (dag 0) wordt de deelnemers gevraagd om gedurende 14 dagen (dag 14) om de twee uur (7-8 keer per dag) hun mond te spoelen met 10 ml van een sucrose- of xylitolbevattende oplossing. De oplossing moet minstens 30 seconden rond en tussen de tanden worden "gezwaaid" en vervolgens worden uitgespuugd. Naspoelen met water is niet toegestaan. Daarnaast krijgen de proefpersonen gedurende de spoelperiode van 14 dagen dagelijks tabletten met probiotische lactobacillen of placebo. De deelnemers zullen grondig worden geïnstrueerd om hun normale eet- en drinkgewoonten en hun dagelijkse mondhygiëneprocedures te handhaven.

Interventie - probiotica en placebo De zuigtabletten met werkzame stof en placebo voor de interventieperiode van 14 dagen zullen aan de deelnemers worden uitgedeeld na basisonderzoek en monsterafname. De actieve zuigtabletten bevatten twee soorten probiotische bacteriën; Lactobacillus rhamnosus PB01 (DSM 14869) en Lactobacillus curvatus EB10 (DSM 32307) in een concentratie van elk 109 kolonievormende eenheden. De tabletten zijn eerder gebruikt in een gerandomiseerde gecontroleerde studie met tandvleesontsteking en microbiële eindpunten (Keller et al., 2018). De volledige samenstelling is weergegeven in bijlage X. De placebotabletten hebben een identieke samenstelling, behalve de bacteriën, met dezelfde grootte en smaak. De deelnemers wordt geïnstrueerd om na regelmatig tandenpoetsen twee keer per dag (ochtend, avond) één tablet langzaam in de mond te laten oplossen. Ze zijn ook verplicht een dagelijks logboek bij te houden van de suikerspoelingen en tabletinnames en de niet-gebruikte tablet bij de eerste follow-up terug te geven. De suikerspoelingen worden bereid en verdeeld in niet-gemarkeerde flessen en de deelnemers krijgen een doseerlepel met een inhoud van 10 ml. De deelnemers krijgen ook een gestandaardiseerde fluoridetandpasta voor gebruik tijdens het hele onderzoek. Een onafhankelijke waarnemer aan de Universiteit van Kopenhagen zal de verzwijging van de toewijzing garanderen.

Klinisch onderzoek en speekselafnames Bij aanvang wordt een klinisch onderzoek uitgevoerd door een ervaren en gekalibreerde tandarts. Er worden geen röntgenfoto's gemaakt. De volgende variabelen worden geregistreerd: a) cariëservaring, uitgedrukt als rotte, gemiste en gevulde tanden (DMFT), b) de hoeveelheid supragingivale plaque (s-PI), c) de mate van tandvleesontsteking (s-GI), en d) bloeden bij sonderen (s-BOP). De PI, GI en BOP worden op een vereenvoudigde manier gescoord op zes vooraf geselecteerde tanden en opnieuw geëvalueerd bij de follow-ups na 14 en 35 dagen. Gestimuleerde hele speekselmonsters (ongeveer 1,0 ml) worden bij aanvang en na 14 en 35 dagen op een gestandaardiseerde manier verzameld door één getrainde onderzoeker. Alle monsters worden bewaard bij -80°C tot verdere verwerking.

Laboratoriumprocedures Het DNA wordt geëxtraheerd met behulp van een Pathogen_Universal_200-protocol (Roche) in overeenstemming met de richtlijnen van de fabrikant bij het Institute for Inflammatory Research, Rigshospitalet, København, Danmark. De profielen van het speekselmicrobioom zullen worden geanalyseerd met Next Generation Sequencing (NGS) en qPCR, zoals prachtig beschreven (Keller et al., 2018).

Eindpunten Speekselbacterieprofielen zullen worden geanalyseerd door middel van de Human Oral Microbe Identification met behulp van Next Generation Sequencing (HOMINGS) in samenwerking met het Costerton Centre van de Universiteit van Kopenhagen. Secundaire eindpunten zijn vereenvoudigde plaque-index (PI), gingivale index (GI) en bloeding bij sonderen (BOP) zoals gescoord na 15 en 35 dagen.

Statistische methoden Alle gegevens worden gecontroleerd op normaliteit en verwerkt met de IBM-SPSS software. Klinische gegevens worden vergeleken met behulp van de Freidman-test met de vergelijking van Dunn. Relatieve hoeveelheden bacterieel DNA worden vergeleken tussen groepen monsters op genus- en soortniveau met behulp van de Kruskal-Wallis- en Mann-Whitney-tests met Benjamini-Hochberg-correctie voor meerdere afhankelijke analyses. P-waarden kleiner dan 0,05 worden als statistisch significant beschouwd.