Effetto di uno stress da zucchero di 2 settimane sui profili batterici nella saliva intera

Obbiettivo

Lo scopo di questo studio è quello di indagare i profili batterici nella saliva intera prima e dopo una provocazione di zucchero di 2 settimane con e senza integratori probiotici in giovani adulti sani. Un secondo obiettivo è studiare i profili batterici 3 settimane dopo la cessazione dello stress da zucchero. Le ipotesi nulle sono:

1. Lo stress indotto dal saccarosio non influisce sui profili batterici nella saliva intera rispetto allo stress indotto da un pentitolo non fermentabile (xilitolo)
2. L'assunzione di batteri probiotici derivati ​​dai lattobacilli non influisce sui cambiamenti indotti dallo zucchero nei profili batterici nella saliva intera rispetto al placebo
3. I profili batterici nella saliva non differiscono dal basale 3 settimane dopo la fine dell'intervento.

Materiale Il gruppo di studio sarà composto da 80 giovani adulti con salute orale senza compromessi che si offrono volontari dopo il consenso informato. I criteri di inclusione sono i) più di 18 anni con più di 20 denti naturali propri, ii) nessuna malattia sistemica cronica che interessa le funzioni salivari, iii) nessun farmaco ad eccezione dei contraccettivi e iv) non fumatore. Il progetto sarà sottoposto ad approvazione etica.

Disegno dello studio Lo studio utilizzerà un disegno randomizzato in triplo cieco, controllato con placebo con quattro bracci paralleli come mostrato nella Figura 1. L'assegnazione del gruppo sarà organizzata tramite buste generate al computer e nascoste per tutte le parti (soggetti, investigatori, personale di laboratorio). Dopo la registrazione di base (giorno 0), ai partecipanti viene chiesto di sciacquarsi la bocca con 10 ml di una soluzione contenente saccarosio o xilitolo ogni due ore (7-8 volte al giorno) per 14 giorni (giorno 14). La soluzione dovrebbe essere "frusciata" intorno e tra i denti per almeno 30 secondi e poi sputata. Non è consentito il risciacquo con acqua. Inoltre, ai soggetti vengono fornite compresse contenenti lattobacilli probiotici o placebo per l'uso quotidiano durante il periodo di risciacquo di 14 giorni. I partecipanti saranno accuratamente istruiti a mantenere le loro normali abitudini alimentari e alcoliche, nonché le loro procedure quotidiane di igiene orale.

Intervento - probiotici e placebo Le pastiglie attive e placebo per il periodo di intervento di 14 giorni saranno distribuite ai partecipanti dopo l'esame e il campionamento di base. Le pastiglie attive contengono due ceppi di batteri probiotici; Lactobacillus rhamnosus PB01 (DSM 14869) e Lactobacillus curvatus EB10 (DSM 32307) a una concentrazione di 109 unità formanti colonia ciascuno. Le compresse sono state precedentemente utilizzate in uno studio controllato randomizzato con infiammazione gengivale ed endpoint microbici (Keller et al., 2018). La composizione completa è mostrata nell'Appendice X. Le pastiglie placebo hanno una composizione identica, ad eccezione dei batteri, con la stessa dimensione e gusto. Ai partecipanti viene chiesto di lasciare che una compressa si sciolga lentamente in bocca due volte al giorno (mattina, sera) dopo essersi lavati regolarmente i denti. Sono inoltre tenuti a tenere un registro giornaliero che copra i risciacqui con lo zucchero e l'assunzione di compresse e a restituire la compressa non consumata al primo controllo. I risciacqui di zucchero saranno preparati e distribuiti in bottiglie non contrassegnate e ai partecipanti verrà fornito un cucchiaio dosatore che indica 10 ml. Ai partecipanti verrà inoltre fornito un dentifricio al fluoro standardizzato da utilizzare durante l'intero studio. Un monitor indipendente dell'Università di Copenaghen garantirà l'occultamento dell'assegnazione.

Esame clinico e prelievi di saliva Al basale, viene eseguito un esame clinico da un dentista esperto e calibrato. Non sono esposte radiografie. Vengono registrate le seguenti variabili: a) esperienza di carie, espressa come denti cariati, mancanti e otturati (DMFT), b) la quantità di placca sopragengivale (s-PI), c) il livello di infiammazione gengivale (s-GI), e d) sanguinamento al sondaggio (s-BOP). Il PI, GI e BOP saranno valutati in modo semplificato su sei denti preselezionati e rivalutati ai follow-up dopo 14 e 35 giorni. Saranno raccolti campioni di saliva intera stimolata (circa 1,0 ml) al basale e dopo 14 e 35 giorni in modo standardizzato da un investigatore addestrato. Tutti i campioni vengono conservati a -80°C fino all'ulteriore elaborazione.

Procedure di laboratorio Il DNA verrà estratto utilizzando un protocollo Pathogen_Universal_200 (Roche) in conformità con le linee guida del produttore presso l'Istituto per la ricerca infiammatoria, Rigshospitalet, København, Danmark. I profili del microbioma salivare saranno analizzati con Next Generation Sequencing (NGS) e qPCR come preziosamente descritto (Keller et al., 2018).

Endpoint I profili batterici salivari saranno analizzati mediante Human Oral Microbe Identification utilizzando Next Generation Sequencing (HOMINGS) in collaborazione con il Costerton Center dell'Università di Copenhagen. Gli endpoint secondari sono l'indice di placca semplificato (PI), l'indice gengivale (GI) e il sanguinamento al sondaggio (BOP) misurati dopo 15 e 35 giorni.

Metodi statistici Tutti i dati saranno controllati per verificarne la normalità ed elaborati con il software IBM-SPSS. I dati clinici vengono confrontati utilizzando il test di Freidman con il confronto di Dunn. L'abbondanza relativa di letture del DNA batterico viene confrontata tra gruppi di campioni a livello di genere e specie utilizzando i test Kruskal-Wallis e Mann-Whitney con correzione Benjamini-Hochberg per analisi dipendenti multiple. I valori P inferiori a 0,05 saranno considerati statisticamente significativi.