Влияние 2-недельного сахарного стресса на бактериальные профили в цельной слюне

Цель

Целью этого исследования является изучение бактериального профиля в цельной слюне до и после 2-недельной сахарной провокации с пробиотическими добавками и без них у здоровых молодых людей. Вторая цель - изучить бактериальные профили через 3 недели после окончания сахарного стресса. Нулевая гипотеза:

1. Стресс, вызванный сахарозой, не влияет на бактериальные профили в цельной слюне по сравнению со стрессом, вызванным неферментируемым пентитом (ксилитом).
2. Прием пробиотических бактерий, полученных из лактобацилл, не влияет на вызванные сахаром изменения бактериального профиля в цельной слюне по сравнению с плацебо.
3. Бактериальные профили в слюне не отличались от исходных через 3 недели после прекращения вмешательства.

Материал Исследовательская группа будет состоять из 80 молодых людей с бескомпромиссным здоровьем полости рта, которые будут добровольно участвовать после информированного согласия. Критерии включения: i) старше 18 лет с более чем 20 собственными естественными зубами, ii) отсутствие хронических системных заболеваний, влияющих на функцию слюноотделения, iii) отсутствие лекарств, кроме противозачаточных, и iv) некурение. Проект будет представлен на этическое одобрение.

Дизайн исследования В исследовании будет использоваться рандомизированный тройной слепой плацебо-контролируемый дизайн с четырьмя параллельными группами, как показано на рисунке 1. Распределение групп будет организовано с помощью созданных компьютером конвертов и скрыто для всех частей (испытуемых, исследователей, сотрудников лаборатории). После регистрации исходного уровня (день 0) участников просят полоскать рот 10 мл раствора, содержащего сахарозу или ксилит, каждые два часа (7-8 раз в день) в течение 14 дней (день 14). Раствор следует «полоскать» между зубами в течение не менее 30 секунд, а затем выплюнуть. Последующее ополаскивание водой не допускается. Кроме того, субъектам давали таблетки, содержащие пробиотические лактобациллы или плацебо, для ежедневного применения в течение 14-дневного периода полоскания. Участники будут тщательно проинструктированы о том, как поддерживать свои обычные привычки в еде и питье, а также выполнять ежедневные процедуры гигиены полости рта.

Вмешательство - пробиотики и плацебо Леденцы с активным веществом и плацебо на 14-дневный период вмешательства будут розданы участникам после исходного обследования и отбора проб. Активные леденцы содержат два штамма пробиотических бактерий; Lactobacillus rhamnosus PB01 (DSM 14869) и Lactobacillus curvatus EB10 (DSM 32307) в концентрации 109 колониеобразующих единиц каждая. Таблетки ранее использовались в рандомизированном контролируемом исследовании с конечными точками воспаления десен и микробов (Keller et al., 2018). Полный состав показан в Приложении X. Леденцы плацебо имеют идентичный состав, за исключением бактерий, того же размера и вкуса. Участников просят медленно растворять одну таблетку во рту два раза в день (утром и вечером) после обычной чистки зубов. Они также должны вести ежедневный журнал, в котором фиксируются полоскания сахаром и прием таблеток, а также возвращать неизрасходованные таблетки при первом последующем осмотре. Сахарные ополаскиватели будут приготовлены и розданы в немаркированные бутылки, а участникам будет предоставлена ​​ложка с дозировкой 10 мл. Участникам также будет предоставлена ​​стандартизированная зубная паста с фтором для использования в течение всего исследования. Независимый наблюдатель Копенгагенского университета гарантирует сокрытие распределения.

Клинический осмотр и взятие проб слюны В начале клиническое обследование проводится одним опытным и квалифицированным стоматологом. Рентгенограммы не выставляются. Регистрируются следующие переменные: а) наличие кариеса, выраженное в виде кариозных, пропущенных и запломбированных зубов (DMFT), б) количество наддесневого зубного налета (s-PI), c) уровень воспаления десен (s-GI) и г) кровотечение при зондировании (s-BOP). PI, GI и BOP будут оцениваться упрощенным способом на шести предварительно выбранных зубах и повторно оцениваться при контрольных осмотрах через 14 и 35 дней. Стимулированные образцы цельной слюны (приблизительно 1,0 мл) будут собираться на исходном уровне и через 14 и 35 дней стандартизированным способом одним обученным исследователем. Все образцы хранятся при температуре -80°C до дальнейшей обработки.

Лабораторные процедуры ДНК будет извлечена с использованием протокола Pathogen_Universal_200 (Roche) в соответствии с рекомендациями производителя в Институте исследований воспаления, Rigshospitalet, Копенгаген, Дания. Профили слюнного микробиома будут проанализированы с помощью секвенирования следующего поколения (NGS) и количественной ПЦР, как это подробно описано (Keller et al., 2018).

Конечные результаты Профили бактерий слюны будут проанализированы с помощью идентификации микробов ротовой полости человека с использованием секвенирования следующего поколения (HOMINGS) в сотрудничестве с Центром Костертона Копенгагенского университета. Вторичными конечными точками являются упрощенный индекс зубного налета (PI), десневой индекс (GI) и кровоточивость при зондировании (BOP), оцениваемые через 15 и 35 дней.

Статистические методы Все данные проверяются на нормальность и обрабатываются с помощью программного обеспечения IBM-SPSS. Клинические данные сравнивают с помощью теста Фрейдмана со сравнением Данна. Относительное количество прочтений бактериальной ДНК сравнивают между группами образцов на уровне рода и вида с использованием тестов Крускала-Уоллиса и Манна-Уитни с поправкой Бенджамини-Хохберга для множественного зависимого анализа. P-значения менее 0,05 будут считаться статистически значимыми.