Effekt af en 2-ugers sukkerstress på bakterieprofiler i hele spyt

Objektiv

Formålet med denne undersøgelse er at undersøge bakterieprofilerne i hele spyt før og efter en 2-ugers sukkerprovokation med og uden probiotiske kosttilskud hos raske unge voksne. Et andet mål er at studere bakterieprofilerne 3 uger efter ophøret af sukkerstressen. Nulhypotesen er:

1. Saccharose-induceret stress påvirker ikke bakterieprofilerne i hele spyt sammenlignet med stress induceret af en ikke-fermenterbar pentitol (xylitol)
2. Indtagelsen af ​​lactobacilli-afledte probiotiske bakterier påvirker ikke de sukker-inducerede ændringer i bakterieprofilerne i hele spyt sammenlignet med placebo
3. Bakterieprofilerne i spyt adskiller sig ikke fra baseline 3 uger efter afslutningen af ​​interventionen.

Materiale Studiegruppen vil bestå af 80 unge voksne med kompromisløs mundsundhed, som melder sig frivilligt efter informeret samtykke. Inklusionskriterierne er i) over 18 år med mere end 20 egne naturlige tænder, ii) ingen kroniske systemiske sygdomme, der påvirker spytfunktionerne, iii) ingen medicin bortset fra præventionsmidler og iv) at være ikke-ryger. Projektet vil blive forelagt til etisk godkendelse.

Undersøgelsesdesign Undersøgelsen vil anvende et randomiseret tripelblindt, placebokontrolleret design med fire parallelle arme som vist i figur 1. Gruppetildelingen vil blive arrangeret gennem computergenererede kuverter og skjult for alle dele (fag, efterforskere, laboratoriepersonale). Efter baseline-registreringen (dag 0) bliver deltagerne bedt om at skylle munden med 10 ml af en saccharose- eller xylitol-holdig opløsning hver anden time (7-8 gange om dagen) i løbet af 14 dage (dag 14). Opløsningen skal "svisses" rundt om og mellem tænderne i mindst 30 sekunder og derefter spyttes ud. Efterskylning med vand er ikke tilladt. Derudover forsynes forsøgspersonerne med tabletter indeholdende enten probiotiske lactobaciller eller placebo til daglig brug i den 14 dage lange skylleperiode. Deltagerne vil blive grundigt instrueret i at opretholde deres normale spise- og drikkevaner samt deres daglige mundhygiejneprocedurer.

Intervention - probiotika og placebo De aktive sugetabletter og placebo-tabletter for den 14-dages interventionsperiode vil blive uddelt til deltagerne efter baseline undersøgelse og prøveudtagning. De aktive pastiller indeholder to stammer af probiotiske bakterier; Lactobacillus rhamnosus PB01 (DSM 14869) og Lactobacillus curvatus EB10 (DSM 32307) i en koncentration på 109 kolonidannende enheder hver. Tabletterne er tidligere blevet brugt i et randomiseret kontrolleret forsøg med gingival inflammation og mikrobielle endepunkter (Keller et al., 2018). Den fulde sammensætning er vist i bilag X. Placebo-pastillerne har en identisk sammensætning, bortset fra bakterierne, med samme størrelse og smag. Deltagerne instrueres i at lade en tablet langsomt opløses i munden to gange dagligt (morgen, aften) efter almindelig tandbørstning. De er også forpligtet til at føre en daglig logbog, der dækker sukkerskylning og tabletindtag, og returnere ikke-forbrugt tablet ved første opfølgning. Sukkerskyllerne vil blive klargjort og fordelt i ikke-mærkede flasker, og deltagerne vil blive forsynet med en dosisske, der angiver 10 mL. Deltagerne får også udleveret en standardiseret fluortandpasta til brug under hele undersøgelsen. En uafhængig monitor ved Københavns Universitet vil garantere, at tildelingen skjules.

Klinisk undersøgelse og spytprøver Ved baseline udføres en klinisk undersøgelse af en erfaren og kalibreret tandlæge. Ingen røntgenbilleder eksponeres. Følgende variable er registreret: a) cariesoplevelse, udtrykt som forfaldne, savnede og fyldte tænder (DMFT), b) mængden af ​​supragingival plak (s-PI), c) niveauet af gingival inflammation (s-GI), og d) blødning ved sondering (s-BOP). PI, GI og BOP vil blive scoret på en forenklet måde på seks forudvalgte tænder og revurderet ved opfølgningerne efter 14 og 35 dage. Stimulerede hele spytprøver (ca. 1,0 ml) vil blive indsamlet ved baseline og efter 14 og 35 dage på en standardiseret måde af en uddannet investigator. Alle prøver opbevares ved -80°C indtil videre behandling.

Laboratorieprocedurer DNA'et vil blive ekstraheret ved hjælp af en Pathogen_Universal_200 protokol (Roche) i overensstemmelse med producentens retningslinjer ved Institut for Inflammatorisk Forskning, Rigshospitalet, København, Danmark. Spytmikrobiomets profiler vil blive analyseret med Next Generation Sequencing (NGS) og qPCR som præcist beskrevet (Keller et al., 2018).

Endpoints Spytbakterieprofiler vil blive analyseret ved hjælp af Human Oral Microbe Identification ved hjælp af Next Generation Sequencing (HOMINGS) i samarbejde med Costerton Center ved Københavns Universitet. Sekundære endepunkter er forenklet plakindeks (PI), gingivalindeks (GI) og blødning ved sondering (BOP) som scoret efter 15 og 35 dage.

Statistiske metoder Alle data vil blive kontrolleret for normalitet og behandlet med IBM-SPSS-softwaren. Kliniske data sammenlignes ved hjælp af Freidman-testen med Dunns sammenligning. Relativ forekomst af bakteriel DNA-aflæsning sammenlignes mellem grupper af prøver på slægts- og artsniveau ved hjælp af Kruskal-Wallis- og Mann-Whitney-testene med Benjamini-Hochberg-korrektion for flere afhængige analyser. P-værdier mindre end 0,05 vil blive betragtet som statistisk signifikante.