Effekten av en 2-ukers sukkerstress på bakterieprofiler i hele spytt

Objektiv

Målet med denne studien er å undersøke bakterieprofilene i hel spytt før og etter en 2-ukers sukkerprovokasjon med og uten probiotiske kosttilskudd hos friske unge voksne. Et annet mål er å studere bakterieprofilene 3 uker etter opphør av sukkerstresset. Nullhypotesen er:

1. Sukroseindusert stress påvirker ikke bakterieprofilene i hele spytt sammenlignet med stress indusert av en ikke-fermenterbar pentitol (xylitol)
2. Inntak av laktobacilli-avledede probiotiske bakterier påvirker ikke de sukkerinduserte endringene i bakterieprofilene i hele spytt sammenlignet med placebo
3. Bakterieprofilene i spytt avviker ikke fra baseline 3 uker etter avsluttet intervensjon.

Materiale Studiegruppen vil bestå av 80 unge voksne med kompromissløs munnhelse som melder seg frivillig etter informert samtykke. Inklusjonskriteriene er i) over 18 år med mer enn 20 egne naturlige tenner, ii) ingen kroniske systemiske sykdommer som påvirker spyttfunksjoner, iii) ingen medisiner bortsett fra prevensjonsmidler, og iv) å være ikke-røyker. Prosjektet vil bli sendt inn for etisk godkjenning.

Studiedesign Studien vil bruke en randomisert trippelblind, placebokontrollert design med fire parallelle armer som vist i figur 1. Gruppetildelingen vil bli ordnet gjennom datagenererte konvolutter og skjult for alle deler (fag, etterforskere, laboratoriepersonell). Etter baseline-registreringen (dag 0) blir deltakerne bedt om å skylle munnen med 10 ml av en sukrose- eller xylitol-holdig løsning annenhver time (7-8 ganger per dag) i løpet av 14 dager (dag 14). Løsningen bør "svisses" rundt og mellom tennene i minst 30 sekunder og deretter spyttes ut. Ingen etterskylling med vann er tillatt. I tillegg får forsøkspersonene tabletter som inneholder enten probiotiske laktobaciller eller placebo til daglig bruk i løpet av den 14 dager lange skylleperioden. Deltakerne vil bli grundig instruert i å opprettholde sine normale spise- og drikkevaner samt sine daglige munnhygieneprosedyrer.

Intervensjon - probiotika og placebo De aktive og placebo-pastiller for den 14-dagers intervensjonsperioden vil bli delt ut til deltakerne etter baselineundersøkelse og prøvetaking. De aktive pastiller inneholder to stammer av probiotiske bakterier; Lactobacillus rhamnosus PB01 (DSM 14869) og Lactobacillus curvatus EB10 (DSM 32307) i en konsentrasjon på 109 kolonidannende enheter hver. Tablettene har tidligere vært brukt i en randomisert kontrollert studie med gingivalbetennelse og mikrobielle endepunkter (Keller et al., 2018). Hele komposisjonen er vist i vedlegg X. Placebopastiller har identisk sammensetning, bortsett fra bakteriene, med samme størrelse og smak. Deltakerne blir bedt om å la en tablett sakte løses opp i munnen to ganger daglig (morgen, kveld) etter vanlig tannpuss. De er også pålagt å føre en daglig loggbok som dekker sukkerskylling og tablettinntak og returnere ikke-konsumert tablett ved første oppfølging. Sukkerskyllingene tilberedes og distribueres i ikke-merkede flasker og deltakerne vil få en doseskje som indikerer 10 ml. Deltakerne vil også få en standardisert fluortannkrem til bruk under hele studien. En uavhengig monitor ved Københavns Universitet vil garantere at tildelingen skjules.

Klinisk undersøkelse og spyttprøvetaking Ved baseline utføres en klinisk undersøkelse av en erfaren og kalibrert tannlege. Ingen røntgenbilder er eksponert. Følgende variabler registreres: a) kariesopplevelse, uttrykt som forfalte, savnede og fylte tenner (DMFT), b) mengden supragingival plakk (s-PI), c) nivået av gingival betennelse (s-GI), og d) blødning ved sondering (s-BOP). PI, GI og BOP vil bli skåret på en forenklet måte på seks forhåndsvalgte tenner og re-evaluert ved oppfølgingene etter 14 og 35 dager. Stimulerte hele spyttprøver (ca. 1,0 ml) vil bli samlet ved baseline og etter 14 og 35 dager på en standardisert måte av en utdannet etterforsker. Alle prøver oppbevares ved -80°C inntil videre behandling.

Laboratorieprosedyrer DNA-et vil bli ekstrahert ved hjelp av en Pathogen_Universal_200-protokoll (Roche) i henhold til produsentens retningslinjer ved Institutt for inflammatorisk forskning, Rigshospitalet, København, Danmark. Profilene til spyttmikrobiomet vil bli analysert med Next Generation Sequencing (NGS) og qPCR som nøyaktig beskrevet (Keller et al., 2018).

Endepunkter Spyttbakterieprofiler vil bli analysert ved hjelp av Human Oral Microbe Identification ved bruk av Next Generation Sequencing (HOMINGS) i samarbeid med Costerton Center ved Københavns Universitet. Sekundære endepunkter er forenklet plakkindeks (PI), gingivalindeks (GI) og blødning-ved-probing (BOP) som skåres etter 15 og 35 dager.

Statistiske metoder Alle data vil bli kontrollert for normalitet og behandlet med IBM-SPSS-programvaren. Kliniske data sammenlignes ved hjelp av Freidman-testen med Dunns sammenligning. Relativ overflod av bakteriell DNA-avlesning sammenlignes mellom grupper av prøver på slekts- og artsnivå ved å bruke Kruskal-Wallis- og Mann-Whitney-testene med Benjamini-Hochberg-korreksjon for flere avhengige analyser. P-verdier mindre enn 0,05 vil anses som statistisk signifikante.