Effet d'un stress sucré de 2 semaines sur les profils bactériens dans la salive entière

Objectif

Le but de cette étude est d'étudier les profils bactériens dans la salive entière avant et après une provocation au sucre de 2 semaines avec et sans suppléments probiotiques chez de jeunes adultes en bonne santé. Un deuxième objectif est d'étudier les profils bactériens 3 semaines après la fin du stress sucré. Les hypothèses nulles sont :

1. Le stress induit par le saccharose n'affecte pas les profils bactériens dans la salive entière par rapport au stress induit par un pentitol non fermentescible (xylitol)
2. L'apport de bactéries probiotiques dérivées de lactobacilles n'affecte pas les changements induits par le sucre dans les profils bactériens de la salive entière par rapport au placebo
3. Les profils bactériens dans la salive ne diffèrent pas de la ligne de base 3 semaines après la fin de l'intervention.

Matériel Le groupe d'étude sera composé de 80 jeunes adultes avec une santé bucco-dentaire sans compromis qui se portent volontaires après avoir donné leur consentement éclairé. Les critères d'inclusion sont i) plus de 18 ans avec plus de 20 dents naturelles propres, ii) aucune maladie systémique chronique affectant les fonctions salivaires, iii) aucun médicament à l'exception des contraceptifs, et iv) être non-fumeur. Le projet sera soumis à une approbation éthique.

Conception de l'étude L'étude utilisera une conception randomisée en triple aveugle contrôlée par placebo avec quatre bras parallèles, comme illustré à la figure 1. L'attribution du groupe sera organisée au moyen d'enveloppes générées par ordinateur et masquées pour toutes les parties (sujets, enquêteurs, personnel de laboratoire). Après l'enregistrement de base (jour 0), les participants sont invités à se rincer la bouche avec 10 ml d'une solution contenant du saccharose ou du xylitol toutes les deux heures (7 à 8 fois par jour) pendant 14 jours (jour 14). La solution doit être "agitée" autour et entre les dents pendant au moins 30 secondes, puis recrachée. Aucun rinçage ultérieur à l'eau n'est autorisé. De plus, les sujets reçoivent des comprimés contenant soit des lactobacilles probiotiques soit un placebo pour une utilisation quotidienne pendant la période de rinçage de 14 jours. Les participants recevront des instructions détaillées pour maintenir leurs habitudes alimentaires et de consommation normales ainsi que leurs procédures quotidiennes d'hygiène bucco-dentaire.

Intervention - probiotiques et placebo Les pastilles actives et placebo pour la période d'intervention de 14 jours seront distribuées aux participants après examen et échantillonnage de base. Les pastilles actives contiennent deux souches de bactéries probiotiques ; Lactobacillus rhamnosus PB01 (DSM 14869) et Lactobacillus curvatus EB10 (DSM 32307) à une concentration de 109 unités formant colonies chacune. Les comprimés ont déjà été utilisés dans un essai contrôlé randomisé avec une inflammation gingivale et des paramètres microbiens (Keller et al., 2018). La composition complète est présentée à l'annexe X. Les pastilles placebo ont une composition identique, à l'exception des bactéries, avec la même taille et le même goût. Les participants sont invités à laisser un comprimé se dissoudre lentement dans la bouche deux fois par jour (matin, soir) après un brossage régulier des dents. Ils sont également tenus de tenir un journal de bord quotidien reprenant les rinçages sucrés et les prises de comprimés et de restituer les comprimés non consommés au premier suivi. Les rinçages au sucre seront préparés et distribués dans des flacons non marqués et les participants se verront remettre une cuillère doseuse indiquant 10 mL. Les participants recevront également un dentifrice au fluor standardisé à utiliser pendant toute la durée de l'étude. Un moniteur indépendant de l'Université de Copenhague garantira la dissimulation de l'attribution.

Examen clinique et prélèvements de salive Au départ, un examen clinique est effectué par un dentiste expérimenté et calibré. Aucune radiographie n'est exposée. Les variables suivantes sont enregistrées : a) l'expérience carieuse, exprimée en dents cariées, manquantes et obturées (DCAO), b) la quantité de plaque supragingivale (s-PI), c) le niveau d'inflammation gingivale (s-GI), et d) saignement au sondage (s-BOP). Les PI, GI et BOP seront notés de manière simplifiée sur six dents présélectionnées et réévalués lors des suivis après 14 et 35 jours. Des échantillons de salive entière stimulée (environ 1,0 ml) seront prélevés au départ et après 14 et 35 jours de manière standardisée par un enquêteur qualifié. Tous les échantillons sont stockés à -80°C jusqu'à un traitement ultérieur.

Procédures de laboratoire L'ADN sera extrait à l'aide d'un protocole Pathogen_Universal_200 (Roche) conformément aux directives du fabricant de l'Institute for Inflammatory Research, Rigshospitalet, København, Danmark. Les profils du microbiome salivaire seront analysés avec le séquençage de nouvelle génération (NGS) et la qPCR comme décrit avec précision (Keller et al., 2018).

Critères d'évaluation Les profils bactériens salivaires seront analysés au moyen de l'identification des microbes oraux humains à l'aide du séquençage de nouvelle génération (HOMINGS) en coopération avec le Centre Costerton de l'Université de Copenhague. Les critères d'évaluation secondaires sont l'indice de plaque simplifié (IP), l'indice gingival (IG) et le saignement au sondage (BOP) tels que notés après 15 et 35 jours.

Méthodes statistiques Toutes les données seront vérifiées pour leur normalité et traitées avec le logiciel IBM-SPSS. Les données cliniques sont comparées à l'aide du test de Freidman avec la comparaison de Dunn. L'abondance relative des lectures d'ADN bactérien est comparée entre des groupes d'échantillons au niveau du genre et de l'espèce à l'aide des tests de Kruskal-Wallis et de Mann-Whitney avec correction de Benjamini-Hochberg pour des analyses dépendantes multiples. Les valeurs P inférieures à 0,05 seront considérées comme statistiquement significatives.