전체 타액의 박테리아 프로필에 대한 2주 설탕 스트레스의 영향

목적

이 연구의 목적은 건강한 젊은 성인을 대상으로 프로바이오틱스 보충제 유무에 관계없이 2주 동안 설탕 유발 전후에 전체 타액의 박테리아 프로필을 조사하는 것입니다. 두 번째 목표는 설탕 스트레스가 종료된 후 3주 후에 박테리아 프로필을 연구하는 것입니다. 귀무 가설은 다음과 같습니다.

1. 자당 유발 스트레스는 비발효성 펜티톨(자일리톨)에 의해 유발된 스트레스와 비교하여 전체 타액의 박테리아 프로필에 영향을 미치지 않습니다.
2. 유산균 유래 프로바이오틱 박테리아의 섭취는 위약과 비교했을 때 전체 타액에서 설탕에 의한 박테리아 프로필의 변화에 ​​영향을 미치지 않습니다.
3. 타액의 박테리아 프로필은 개입 종료 후 3주 동안 기준선과 다르지 않습니다.

재료 연구 그룹은 정보에 입각한 동의 후 자원 봉사하는 타협하지 않는 구강 건강을 가진 80명의 청년으로 구성됩니다. 포함 기준은 i) 18세 이상으로 20개 이상의 자연치아, ii) 타액 기능에 영향을 미치는 만성 전신 질환 없음, iii) 피임약을 제외한 약물 복용 없음, iv) 비흡연자입니다. 프로젝트는 윤리적 승인을 위해 제출됩니다.

연구 설계 이 연구는 그림 1과 같이 4개의 병렬 암이 있는 무작위 삼중 맹검, 위약 대조 설계를 사용할 것입니다. 그룹 할당은 컴퓨터 생성 봉투를 통해 배열되고 모든 부분(피험자, 조사자, 실험실 직원)에 대해 숨겨집니다. 기준 등록(0일) 후 참가자는 14일(14일) 동안 2시간마다(하루 7-8회) 자당 또는 자일리톨 함유 용액 10mL로 입을 헹구도록 요청받습니다. 용액은 적어도 30초 동안 치아 주위와 치아 사이에서 "스위쉬"한 다음 뱉어내야 합니다. 물로 헹구는 것은 허용되지 않습니다. 또한 피험자에게는 14일의 헹굼 기간 동안 매일 사용할 프로바이오틱 유산균 또는 위약이 포함된 정제가 제공됩니다. 참가자들은 일상적인 구강 위생 절차뿐만 아니라 정상적인 식습관과 음주 습관을 유지하도록 철저하게 교육받을 것입니다.

개입 - 프로바이오틱스 및 위약 14일 개입 기간 동안 활성 및 위약 마름모꼴은 기본 검사 및 샘플링 후 참가자에게 배포됩니다. 활성 사탕에는 두 종류의 프로바이오틱 박테리아가 포함되어 있습니다. 락토바실러스 람노서스 PB01(DSM 14869) 및 락토바실러스 커바투스 EB10(DSM 32307) 각각 109 콜로니 형성 단위 농도. 정제는 이전에 치은 염증 및 미생물 종점에 대한 무작위 대조 시험에서 사용되었습니다(Keller et al., 2018). 전체 구성은 부록 X에 나와 있습니다. 위약 마름모꼴은 크기와 맛이 같은 박테리아를 제외하고 동일한 구성을 가지고 있습니다. 참가자는 규칙적인 양치질 후 1일 2회(아침, 저녁) 입안에서 1정을 천천히 녹이도록 지시받습니다. 그들은 또한 설탕 헹굼 및 알약 섭취를 다루는 일일 일지를 유지하고 첫 번째 후속 조치에서 소비하지 않은 알약을 반환해야 합니다. 설탕 헹굼물은 표시되지 않은 병에 준비 및 배포되며 참가자에게는 10mL를 나타내는 용량 스푼이 제공됩니다. 참가자들은 또한 전체 연구 동안 사용할 표준화된 불소 치약을 받게 됩니다. 코펜하겐 대학교의 독립 모니터가 할당 은닉을 보장합니다.

임상 검사 및 타액 샘플링 기준선에서 임상 검사는 숙련되고 보정된 한 명의 치과의사가 수행합니다. 방사선 사진은 노출되지 않습니다. 다음 변수가 등록됩니다. d) 블리딩-온-프로빙(s-BOP). PI, GI 및 BOP는 6개의 사전 선택된 치아에 대해 간단한 방식으로 점수를 매기고 14일 및 35일 후 후속 조치에서 재평가됩니다. 자극된 전체 타액 샘플(약 1.0mL)은 한 명의 숙련된 조사자가 표준화된 방식으로 기준선과 14일 및 35일 후에 수집합니다. 모든 샘플은 추가 처리가 될 때까지 -80°C에서 보관됩니다.

실험실 절차 DNA는 Inflammatory Research(Institute for Inflammatory Research, Rigshospitalet, København, Danmark)의 제조업체 지침에 따라 Pathogen_Universal_200 프로토콜(Roche)을 사용하여 추출됩니다. 타액 미생물 군집의 프로필은 소중하게 설명된 대로 NGS(Next Generation Sequencing) 및 qPCR로 분석될 것입니다(Keller et al., 2018).

종점 타액 박테리아 프로필은 코펜하겐 대학의 Costerton 센터와 공동으로 HOMINGS(차세대 시퀀싱을 사용하는 인간 구강 미생물 식별)를 통해 분석됩니다. 2차 종료점은 15일 및 35일 후 채점한 단순 플라크 지수(PI), 치은 지수(GI) 및 탐침 시 출혈(BOP)입니다.

통계적 방법 모든 데이터는 정규성을 확인하고 IBM-SPSS 소프트웨어로 처리합니다. 임상 데이터는 Dunn의 비교와 함께 Freidman 테스트를 사용하여 비교됩니다. 박테리아 DNA 읽기의 상대적 풍부도는 다중 종속 분석을 위해 Benjamini-Hochberg 보정과 함께 Kruskal-Wallis 및 Mann-Whitney 테스트를 사용하여 속 및 종 수준의 샘플 그룹 간에 비교됩니다. 0.05 미만의 P-값은 통계적으로 유의한 것으로 간주됩니다.